Патент на изобретение №2263143
|
||||||||||||||||||||||||||
(54) ШТАММ БАКТЕРИЙ STREPTOCOCCUS PYOGENES №289, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИН ПРОТИВ СТРЕПТОКОККОЗА ПУШНЫХ ЗВЕРЕЙ
(57) Реферат:
Изобретение относится к области биотехнологии и ветеринарии. Штамм депонирован в коллекции штаммов-возбудителей заболеваний пушных зверей музея бактериальных и вирусных культур Научно-исследовательского института пушного звероводства и кролиководства (НИИПЗК) им. В.А. Афанасьева и имеет регистрационный номер 289 М-положительный. Штамм относится к стрептококкам группы А. Штамм культивируют на мясопептонном бульоне, в среде Тодда-Хевитта, среде Пайка при 37°С в течение 18-20 часов. После контроля выросшей культуры на вирулентность отделенную биомассу подвергают инактивации и дальнейшей экстракции путем добавления соляной кислоты. Далее добавляют адьювант-гидроокись алюминия и расфасовывают. Изобретение позволяет предотвратить потери при воспроизводстве пушных зверей в хозяйствах, неблагополучных по стрептококковой инфекции.
Изобретение относится к области биотехнологии и ветеринарии и предназначено для производства вакцинных препаратов против стрептококковой инфекции пушных зверей, преимущественно песцов и лисиц. Цель изобретения – выделение штамма для изготовления вакцины против стрептококкоза песцов. Стрептококковая инфекция распространена повсеместно, наносит значительный экономический ущерб звероводству и представляет опасность здоровью людей. В зверосовхозах ежегодно регистрируются заболевания песцов и лисиц, кроликов, нутрий, хорей. Патология при стрептококковой инфекции как у людей, так и у животных очень разнообразна – поражение верхних дыхательных путей и легких, поражение молочных желез. У молодняка лисиц и песцов она вызывает септические поражения организма и ранний отход в первые дни жизни. Возбудитель стрептококкоза группы А носит антигенную структуру. М-вещество – белок, с которым связаны вирулентность и иммуногенность микробной клетки. Поэтому эффективность специфической профилактики определяется наличием М-фактора в антигенном составе входящих в вакцину компонентов. Изобретение предназначено для производства вакцинных препаратов против стрептококковой инфекции пушных зверей, преимущественно песцов и лисиц. Штамм бактерий Streptococcus pyogenes №289 выделен от самки песца и депонирован в коллекцию штаммов возбудителей заболеваний пушных зверей музея бактериальных и вирусных культур Научно-исследовательского института пушного звероводства и кролиководства им. В.А.Афанасьева и имеет регистрационный номер 289 М-положительный. М-положительный штамм культивируют на бульоне Тодда-Хевитта в течение 15-18 часов при 35-37°С. После проверки чистоты культуры отделенную биомассу подвергают инактивации прогреванием, готовят кислый экстракт. Далее добавляют адьювант – гидроокись алюминия и расфасовывают. Изобретение позволяет предотвратить потери при воспроизводстве пушных зверей в хозяйствах, неблагополучных по стрептококкозу. Известен вакцинный штамм “К-ДЕП” стрептококка серогруппы С, используемый для изготовления инактивированной ГОА-формолвакцины против стрептококкоза нутрий. Патент №2097422 от 27.11.1997 г. Штамм выделен от нутрий, адаптирован к этому виду зверей и используется для изготовления профилактических препаратов против стрептококкоза нутрий. Однако вакцинных штаммов стрептококка, выделенных от песцов и лисиц и применяемых для изготовления вакцины против стрептококкоза песцов и лисиц, до настоящего времени не зарегистрировано. Технический результат изобретения заключается в получении штамма Streptococcus pyogenes №289, положительного по М-белку и позволяющего изготовить вакцину против Streptococcus pyogenes группы А на основе М-фактора патогенности. Сущность изобретения: штамм бактерии Streptococcus pyogenes №289 выделен из самки песца и депонирован в коллекции штаммов-возбудителей заболеваний пушных зверей Музея бактериальных и вирусных культур Научно-исследовательского института пушного звероводства и кролиководства (НИИПЗК) им. В.А.Афанасьева и имеет регистрационный номер 289 М-положительный. М-положительный штамм Streptococcus pyogenes №289 предназначен в качестве продуцента стрептококкового антигена М-белка при изготовлении специфического иммунного препарата при стрептококковой инфекции. Штамм бактерий Streptococcus pyogenes НИИПЗК №289 характеризуется следующими признаками: Генетические маркеры – серовариант 24; – М-положительный с высокой М-антигенной активностью. Морфологические свойства – гемолитический стрептококк типа А; – производственная культура представляет собой неподвижные шаровидные кокки диаметром 0,8-1,0 Культурные свойства – факультативный анаэроб, оптимальная температура роста 37°С, верхняя и нижняя температурная граница 20°С и 24°С; – на агаре с кровью образуют мелкие (102 мм в диаметре) полупрозрачные колонии, сероватые или бесцветные, которые не врастают в агар, с выраженной зоной гемолиза; – в жидких питательных средах придонно-пристеночный рост; – общепринятые среды для выращивания МПА с 5% дефибрированной крови барана, полужидкий агар с сывороткой, бульона Мартена с 0,2% глюкозы рН=7,4-7,6; – хорошо сохраняется при условии лиофильного высушивания с сахорозожелатинозным стабилизатором, а также при быстром замораживании и хранении при 40°С. Ферментативные свойства – не разжижает желатин; – свертывает молоко; – свертывает и обесцвечивает лакмусовое молоко; – ферментирует глюкозу, мальтозу, сахарозу; – не расщепляет маннит, сорбит, дульцит. Вирулентные свойства – при внутрибрюшинном введение белым мышам LD/50 составляет 10×0,2 мл. Антигенные свойства – штамм содержит М-белок, обладает антигенными свойствами и стимулирует образование в сыворотки крови М-специфических антител, обладающих защитным действием против стрептококка. Токсические свойства – в жидкой и твердой питательной среде вырабатывает стрептококковый эритрогенный термолабильный экзотоксин и термолабильный нуклеопротеидный аллерген. Хранение штамма – при температуре 6±2°С в лиофилизированном состоянии более 2 лет; в пробирках на МПБ при +9°С 30 дней; – в ампулах по 0,5 мл культуры Str. на среде Тодда-Хевитта при температуре 70°С более 3 лет. Контроль за состоянием штамма – морфологические, биохимические, культуральные и вирулентные свойства (М-фактор) проверяют перед производством иммунного препарата. Технический результат заключается в получении нового штамма, способного продуцировать М-фактор патогенности в необходимом количестве для создания иммунитета против стрептококкоза. Изобретение иллюстрируется следующими примерами Пример 1. Штаммы культуры Streptococcus pyogenes культивировали на бульоне Тодда-Хевитта при 37°С. Через 12 часов культуру сеяли в пробирки с донорской человеческой кровью, не содержащей антител к Streptococcus pyogenes, и выращивали в течение 18-24 часов. По истечении срока инкубации культуру проверяли на чистоту роста в мазках, окрашенных по Грамму. Полученную культуру посеяли на среду Тодда-Хевитта, инкубировали в течение 6 часов. Полученной культурой в логарифмической стадии роста засевали 500 мл со средой Тодда-Хевитта, инкубировали в течение 18-20 часов при 37°С. После инкубации флаконы с культурой центрифугировали при 150 об/мин в течение 30 минут. Надосадочную жидкость сливали. В осадок добавляли 50 мл физиологического раствора, ресуспендировали и проверяли на чистоту роста в мазках, окрашенных по Грамму. Полученную суспензию прогревали при 60°С 30 минут для инактивации стрептококковой культуры. После инактивации суспензию проверяли на стерильность. Суспензию вновь центрифугировали при 1500 об/мин – 30 минут. В надосадочную жидкость добавили 0,35 мл HCl. Полученную суспензию прогрели в водяной бане при 100°С в течение 10 минут. Суспензию охладили, добавили каплю Фенола Красного в каждый флакон. Довели рН до 7,0. К полученной суспензии добавили адьювант – гидроокись алюминия. Полученный антиген проверили на наличие М-белка в реакции преципитации с контрольной сывороткой. Пример 2. Полученную по примеру 1 вакцину проверяли на безвредность на 9 песцах. Вакцину вводили в/м в область правого бедра в дозах: – 3 песцам по 1,0 мл, – 3 песцам по 2,0 мл, – 3 песцам по 3,0 мл. Проводили ежедневное наблюдение за песцами в течение 7 дней с индивидуальным прощупыванием места инъекции. Термометрию песцов проводили дважды на 2 и 4 дни после введения препарата. Результаты исследования показали, что все песцы вели себя обычно: корм поедали полностью, агрессивность не наблюдалась. Температура тела была в пределах нормы – 37-39°С. При прощупывании места инъекции вакцины опухание конечности и болезненности не обнаружено. Пример 3. Полученной вакциной иммунизировали песцов на ферме, неблагополучной по стрептококкозу, для исследования влияния иммунизации на результаты воспроизводства, поскольку основная патология при стрептококковой инфекции проявляется в период воспроизводства и в первые три недели после рождения щенков. В данном хозяйстве отмечались случаи абортов, рождение мертвых щенков, гибель щенков в первые дни жизни. При этом у аборт-плодов и павших новорожденных щенков при бактериологическом исследовании была выделена культура Streptococcus pyogenes. Полученной вакциной по примеру 1 иммунизировали 50 самок песцов в/м в дозе 1,5 мл, в качестве контроля служат другие 50 самок, аналогичные по возрасту, условиям кормления и содержания. Установлено, что применение вакцины повысило плодовитость песцов опытной группы на 0,5 щенка. Вакцина предотвратила гибель щенков в первые дни жизни, в то время как у некоторых самок контрольной группы выход щенков составил 3-5 голов. Таким образом, вакцина из штамма Streptococcus pyogenes №289 позволяет предотвратить скрытые потери при воспроизводстве пушных зверей в хозяйствах, неблагополучных по стрептококкозу песцов.
Формула изобретения
Штамм бактерий Streptococcus pyogenes № 289 (депонирован в НИИПЗК, рег. №289 М – положительный), используемый для изготовления вакцин против стрептококкоза пушных зверей.
MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Дата прекращения действия патента: 06.01.2006
Извещение опубликовано: 27.10.2007 БИ: 30/2007
|
||||||||||||||||||||||||||