Патент на изобретение №2260054

(54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ МИКРОФЛОРЫ УРОГЕНИТАЛЬНОГО ТРАКТА ЧЕЛОВЕКА

(57) Реферат:

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано в практической работе бактериологических лабораторий для установления диагностической значимости микроорганизмов при местных инфекционно-воспалительных заболеваниях и дисбиотических состояниях урогенитального тракта человека. Способ осуществляют путем забора исследуемого материала, его посева на селективные питательные среды, выделения и идентификации чистых культур микроорганизмов, определения у выделенных микроорганизмов способности к инактивации антимикробного белка тромбоцитов. К нормальной микрофлоре урогенитального тракта человека относят микроорганизмы, не обладающие способностью к инактивации антимикробного белка тромбоцитов или обладающие способностью к инактивации антимикробного белка тромбоцитов 20% и менее. Использование способа позволяет повысить точность диагностики воспалительных заболеваний урогенитального тракта человека микробной этиологии и эффективность выбора рациональной антибиотикотерапии. 6 табл.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано в практической работе бактериологических лабораторий для установления диагностической значимости микроорганизмов при местных инфекционно-воспалительных заболеваниях и дисбиотических состояниях урогенитального тракта человека с целью повышения эффективности диагностики и корригирующей терапии.

Рост вялотекущих и персистирующих инфекций урогенитального тракта человека [1], вызываемых условно-патогенными микроорганизмами [2], диктует необходимость поиска новых способов дифференциации нормальной микрофлоры урогенитального тракта от этиологических агентов местных инфекционно-воспалительных процессов.

Известно определение видового состава микрофлоры урогенитального тракта человека для дифференциации нормальной микрофлоры от возбудителей местных инфекционно-воспалительных заболеваний [3, 4].

Однако в настоящее время большинство дисбиотических и местных инфекционно-воспалительных состояний урогенитального тракта вызывается микроорганизмами, которые могут быть отнесены к нормальной либо контаминирующей микрофлоре, что затрудняет дифференциацию представителей нормальной микрофлоры от возбудителей инфекционно-воспалительного процесса [4, 5, 6].

Известна дифференциация резидентной и транзиторной стафилококковой микрофлоры, основанная на оценке способности микроорганизмов к инактивации лизоцима [7] или их устойчивости к коммерческому препарату лейкоцитарного интерферона [8].

Однако указанные способы предназначены лишь для дифференциации резидентной и транзиторной стафилококковой микрофлоры у бактерионосителей в носовой полости и не могут быть использованы для других видов микроорганизмов и иных экологических ниш.

Наиболее близким по совокупности признаков к заявляемому способу является способ дифференциации микрофлоры урогенитального тракта человека, основанный на определении видового состава микроорганизмов и их способности к инактивации бактерицидных факторов – лизоцима (антилизоцимной активности) и комплемента (антикомплементарной активности) [9].

Существенным недостатком данного способа является необходимость определения у выделенных микроорганизмов способности к инактивации нескольких бактерицидных факторов (лизоцима и комплемента), что трудоемко в условиях клинической лаборатории и занимает длительное время. Кроме того, известно, что представители нормальной микрофлоры также обладают выраженной способностью к инактивации лизоцима и комплемента [10, 11], что также затрудняет дифференциацию нормальной микрофлоры от возбудителей инфекционно-воспалительного процесса.

Заявляемый способ решает задачу повышения эффективности дифференциации микрофлоры урогенитального тракта человека, что способствует улучшению диагностических и лечебных мероприятий.

Для решения указанной задачи в заявляемом способе дифференциации микрофлоры урогенитального тракта человека проводят забор исследуемого материала, его посев на селективные питательные среды, выделение и идентификацию чистых культур микроорганизмов, у выделенных микроорганизмов определяют способность к инактивации антимикробного белка тромбоцитов, при этом к нормальной микрофлоре урогенитального тракта человека относят микроорганизмы, не обладающие способностью к инактивации антимикробного белка тромбоцитов или обладающие способностью к инактивации антимикробного белка тромбоцитов 20% и менее.

Новым в заявляемом способе является то, что у выделенных микроорганизмов определяют способность к инактивации антимикробного белка тромбоцитов, при этом к нормальной микрофлоре урогенитального тракта человека относят микроорганизмы, не обладающие способностью к инактивации антимикробного белка тромбоцитов или обладающие способностью к инактивации антимикробного белка тромбоцитов 20% и менее.

Достигаемый при осуществлении изобретения технический результат состоит в том, заявляемый способ путем определения способности микрофлоры урогенитального тракта к инактивации антимикробного белка тромбоцитов позволяет повысить точность диагностики воспалительных заболеваний урогенитального тракта микробной этиологии, что способствует выбору рациональной антибиотикотерапии.

Известно, что одним из бактерицидных факторов макроорганизма, играющих ключевую роль в уничтожении различных микроорганизмов, является антимикробный белок тромбоцитов [12].

Известно использование феномена способности микроорганизмов к инактивации бактерицидных факторов в клинике для дифференциальной диагностики заболеваний, вызываемых патогенными и условно-патогенными микроорганизмами [13], а также для выбора рациональной терапии и оценки ее эффективности [14].

Авторами установлены различия в распространенности и выраженности способности к инактивации лизоцима, комплемента, антимикробного белка тромбоцитов у микроорганизмов, выделенных из урогенитального тракта здоровых лиц и больных хроническими воспалительными заболеваниями урогенитального тракта (уретрит, простатит).

Антимикробный белок тромбоцитов получали известным способом [15].

Способность выделенных микроорганизмов к инактивации комплемента, лизоцима, антимикробного белка тромбоцитов определяли по известным методикам [16, 17, 18].

Результаты исследований представлены в таблицах 1, 2, 3, 4. Как видно из таблиц 1 и 2, у штаммов микроорганизмов, выделенных от здоровых лиц и больных хроническими неспецифическими воспалительными заболеваниями урогенитального тракта, отсутствуют достоверные различия по распространенности способности к инактивации лизоцима и комплемента. В то же время от больных хроническими неспецифическими воспалительными заболеваниями урогенитального тракта достоверно чаще выделяются микроорганизмы, обладающие способностью инактивировать антимикробный белок тромбоцитов.

Как видно из таблиц 3 и 4, у штаммов микроорганизмов, выделенных от здоровых лиц и больных хроническими неспецифическими воспалительными заболеваниями урогенитального тракта, отсутствуют достоверные различия по степени выраженности способности к инактивации лизоцима и комплемента, тогда как выраженность способности микроорганизмов, выделенных от больных хроническими неспецифическими воспалительными заболеваниями урогенитального тракта, к инактивации антимикробного белка тромбоцитов достоверно выше.

Авторами при изучении клинических штаммов микроорганизмов установлены пороговые значения способности микроорганизмов к инактивации антимикробного белка тромбоцитов, позволяющие отнести их к нормальной микрофлоре урогенитального тракта. Результаты представлены в таблицах 5 и 6.

Как видно из таблиц 5 и 6, микроорганизмы, выделенные из урогенитального тракта здоровых лиц, не обладают способностью к инактивации антимикробного белка тромбоцитов более 20%, тогда как микроорганизмы, выделенные от больных местными неспецифическими инфекционно-воспалительными заболеваниями урогенитального тракта, гораздо чаще (от 43,6 до 100%) инактивируют антимикробный белок тромбоцитов более 20%.

Способ осуществляется следующим образом.

Стерильным уретральным зондом или ложкой Фолькмана осуществляют забор исследуемого материала (отделяемое уретры и/или секрет простаты). Семенную жидкость получают путем мастурбации.

Исследуемый материал методом секторных посевов [19] засевают на селективные питательные среды. Посевы инкубируют при 37°С в течение 24-48 часов.

Идентификацию выделенных штаммов микроорганизмов проводят общепринятыми методами на основании морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических и антигенных свойств [20].

У выделенных культур микроорганизмов определяют способность к инактивации антимикробного белка тромбоцитов.

Способность микроорганизмов к инактивации антимикробного белка тромбоцитов выражают в % инактивации антимикробного белка тромбоцитов в опыте по сравнению с контролем.

При этом к нормальной микрофлоре урогенитального тракта человека относят микроорганизмы, не обладающие способностью к инактивации антимикробного белка тромбоцитов, либо обладающие способностью к инактивации антимикробного белка тромбоцитов 20% и менее.

Примеры конкретного выполнения способа.

Пример 1. У больного В., 34 лет, с диагнозом “хронический неспецифический уретрит” уретральным зондом был осуществлен забор отделяемого уретры, которое было засеяно на селективные питательные среды (Columbia-agar, среда Эндо, желточно-солевой агар). Через 48 часов инкубации при 37°С были выделены в чистой культуре и по совокупности признаков идентифицированы как Staphylococcus epidermidis (показатель микробной обсемененности – 10⁴ КОЕ/мл) и Corynebacterium genitalium (показатель микробной обсемененности -10³ КОЕ/мл). Для дифференциации нормальной микрофлоры от возбудителя уретрита у выделенных микроорганизмов была изучена способность к инактивации антимикробного белка тромбоцитов. Штамм C.genitalium не обладал способностью к инактивации антимикробного белка тромбоцитов, что позволило отнести его к нормальной микрофлоре урогенитального тракта, а штамм S.epidermidis обладал способностью к инактивации антимикробного белка тромбоцитов 25%, что позволило отнести его к возбудителю уретрита. Изучение спектра чувствительности к антибиотикам и проведение целенаправленной антибиотикотерапии привело к элиминации возбудителя и клиническому выздоровлению.

Пример 2. У больного М., 45 лет, с диагнозом “Хронический простатит. Бесплодие” из эякулята были выделены в чистой культуре микроорганизмы, которые по совокупности признаков идентифицированы как Esherichia coli, Staphylococcus hominis и Enterococcus faecalis. С целью дифференциации нормальной микрофлоры от возбудителей простатита у выделенных микроорганизмов была определена способность к инактивации антимикробного белка тромбоцитов согласно примеру 1. Выявлено, что штамм E.coli обладал способностью к инактивации антимикробного белка тромбоцитов 50%, штамм S. hominis обладал указанной способностью 10% и штамм Е. faecalis – 35%. На основании полученных данных S. hominis был отнесен к представителю нормальной микрофлоры урогенитального тракта, a E.coli и E.faecalis – к возбудителям хронического простатита. Проведение курса направленной антибиотикотерапии привело к элиминации E.coli и E.faecalis и купированию воспалительного процесса в предстательной железе.

Таким образом, использование заявляемого способа позволяет повысить точность диагностики воспалительных заболеваний урогенитального тракта человека микробной этиологии и выбора рациональной антибиотикотерапии.

Источники информации

8. Патент РФ 2092562 C 12 Q 1/04. Опубл. 10.10.1997.

9. Иванов Ю.Б. Факторы персистенции микрофлоры репродуктивного тракта мужчин в норме и при патологии. Автореф. дисс… канд. мед. наук. – Оренбург, 1998. – С.7-11. (прототип).

13. Бухарин О.В., Усвяцов Б.Я. Бактерионосительство. – Екатеринбург: УрО РАН, 1996. – С.114-132.

16. Брудастов Ю.А. Антикомплементарная активность бактерий: Автореф. дисс. … канд. мед. наук, – Челябинск, 1992. – 21 с.

18. Бухарин О.В., Сулейманов К.Г., Чернова О.Л. и др. Способность микроорганизмов к инактивации бактерицидного действия тромбоцитарного катионного белка (

^th ed. Vol.1-2. – Baltimore, 1986.

Формула изобретения

Способ дифференциации нормальной микрофлоры урогенитального тракта человека от возбудителей инфекционно-воспалительного процесса, включающий забор исследуемого материала, его посев на селективные питательные среды, выделение и идентификацию чистых культур микроорганизмов, определение способности выделенных микроорганизмов к инактивации бактерицидных факторов, отличающийся тем, что в качестве бактерицидного фактора используют антимикробный белок тромбоцитов и к нормальной микрофлоре урогенитального тракта человека относят микроорганизмы, обладающие 20%-ной и менее способностью к инактивации антимикробного белка тромбоцитов либо не обладающие такой способностью.

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 22.01.2006

Извещение опубликовано: 27.01.2007 БИ: 03/2007