Патент на изобретение №2258220

(54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЕЧЕНИЯ ПИОДЕРМИЙ

(57) Реферат:

Способ относится к области медицины. Способ осуществления путем выделения из околоочаговой зоны чистых культур Staphylococcus aureus и Staphylococcus epidermidis, определения их антилизоцимной активности. При показателях уровня антилизоцимной активности ниже 4,5±0,5 мкг/мл прогнозируется острое течение пиодермии, при показателях антилизоцимной активности выше 6±0,5 мкг/мл прогнозируется хроническое течение пиодермии. Заявляемый способ позволяет повысить эффективность диагностики пиодермии, определение стратегии терапии гнойничковых заболеваний кожи. 5 табл.

Способ прогнозирования течения пиодермий относится к медицине, а именно к медицинской микробиологии. Может найти применение в бактериологических лабораториях кожно-венерологических диспансеров, решающих вопросы диагностики и лечения больных с гнойничковыми заболеваниями кожи.

Пиодермии составляют значительную часть кожных болезней, занимая первое место среди всех дерматозов. На долю пиодермий приходится около половины всех случаев нетрудоспособности, обусловленных заболеваниями кожи, что говорит о практической и социальной значимости данной патологии (Ю.К.Скрипкин, 2000 г.). По данным клиники Оренбургской государственной медицинской академии на базе областного кожно-венерологического диспансера замечен рост заболеваемости по области, с 1975 по 1987 г.г. больные с пиодермиями составили 23,5% к общему числу стационарных больных, к 2000 году их численность достигла 48,2%. Представленные данные соответствуют российской тенденции (А.И.Новиков, 2001 г.).

Анализ мировой литературы с 1975 по 2002 г.г. (Blitzer A., Binder W.J. 2002) подтвердил актуальность этой проблемы.

В начале развития заболевания важно прогнозировать течение процесса, что необходимо для определения тактики дальнейшего лечения.

В повседневной практике врача-дерматовенеролога течение пиодермии определяется на основании клинических данных катамнестически. По первичным морфологическим элементам невозможно предсказать длительность заболевания. Чаще всего пиодермии носят острый характер и в течение 7-10 дней полностью разрешаются, но в некоторых случаях несмотря на проводимое лечение приобретают хроническое течение (более 2 месяцев).

Известен способ прогнозирования развития пиодермий у детей с бронхолегочной патологией в условиях гнотобиологической изоляции (Пронина Елена Александровна, автореферат на соискание ученой степени кандидата медицинских наук. Микробиоценоз кожи детей, находившихся в условиях гнотобиологической изоляции. Саратовский медицинский университет, кл. шифр 030007/140009, ВД: Саратов, 1998 год, с.19). Сущность способа заключается в определении количественной характеристики микрофлоры внешне здоровой кожи в височной области. Для забора материала использовали стерильные бумажные диски, закрепленные на металлические поршни. При оценке микробиоценоза учитывали:

1. Общую бактериальную обсеменность.

2. Число (количество) грам-положительных кокков.

3. Число (количество) коринебактерий и других грам-положительных палочек.

4. Число дрожжеподобных грибов

5. Число грам-отрицательных микроорганизмов.

Оценивалась мера значимости видов, показатель плотности (численности) популяции вида. После проведенного анализа результатов при помощи алгоритма определялось 4 состояния экосистемы от эубиоза до дисбактериоза. По степени дисбактериоза прогнозировалось развитие пиодермий.

Недостатками указанного способа являются:

1. Трудоемкость – использование особых приспособлений для забора материала (дисков и поршней).

2. Оценивалась микрофлора височной области, нетипичной для развития пиодермий.

3. Способ требует большого количества поэтапных расчетов.

4. Способ ориентирован на узкую группу больных, находящихся в условиях гнотобиологической изоляции.

5. Способ прогнозирует вероятность развития гнойничкового заболевания кожи, но не позволяет определить течение процесса, следовательно, неприменим для определения тактики лечения пиодермий.

6. Способ основан на количественной оценке микробиоценоза кожи, а именно на показателе микробной обсемененности. Показатель микробной обсемененности весьма варьирует не только в зависимости от общего состояния организма, но и в зависимости от возрастной группы больных, условий окружающей среды, загрязненности и многих других причин. Повышение уровня показателя микробной обсемененности не всегда свидетельствует о развитии гнойничкового заболевания кожи (Нобл, 1989 г.)

Гнойное воспаление кожи – пиодермия – формируется под влиянием самых разнообразных возбудителей, но в основном стафилококков и стрептококков с участием условно патогенной флоры. Пиококковые поражения кожи в связи с этим чрезвычайно распространены и занимают первое место в структуре кожных болезней.

Частота гнойничковых заболеваний объясняется прежде всего крайней распространенностью в природе их возбудителей, особенно стафилококков, а также значительной изменчивостью пиококков с переходом непатогенных форм в патогенные на поверхности самой кожи. В значительной мере этому способствует антилизоцимная активность возбудителей. Антилизоцимная активность – это способность бактерий специфически инактивировать лизоцим хозяина (О.В.Бухарин, Б.Я.Усвяцов, 1982 г.)

Антилизоцимная активность бактерий имеет широкое биологическое распространение и встречается у микроорганизмов разных таксономических групп, относящихся к разным семействам, родам и видам.

Столь широкое распространение у различных видов микроорганизмов способности специфически подавлять ферментативную активность лизоцима свидетельствует о важной физиологической роли этого биологического свойства.

Известен способ прогнозирования туберкулезного процесса в легких, основанный на определении антилизоцимной активности возбудителя, выделенного из патологического материала (Патент на изобретение №2121302 от 10.11.98 г.). В данном патенте по уровню антилизоцимной активности прогнозировалось обострение туберкулезного процесса в легких. Особенностью изобретения аналога является выделение возбудителя из патологического очага в легких. Прогнозирование течения процесса осуществляется по уровню одного из факторов персистенции: антилизоцимной активности.

Исходя из изученного материала, авторы выбирают в качестве прототипа «Способ прогнозирования развития пиодермий у детей с бронхолегочной патологией в условиях гнотобиологической изоляции» (Пронина Елена Александровна, автореферат на соискание ученой степени кандидата медицинских наук. Микробиоценоз кожи детей, находившихся в условиях гнотобиологической изоляции. Саратовский медицинский университет, кл.шифр 030007/140009, ВД: Саратов, 1998 год, с.19), так как этот способ совпадает как по назначению, так и по существенному признаку с новым предъявлением.

Новизной предложения является прогнозирование течения пиодермий, учитывая экологическую нишу возбудителя.

Существенным отличием является то, что из околоочаговой зоны выделяют культуры Staphylococcus aureus и Staphylococcus epidermidis, определяют уровень их антилизоцимной активности и при показателях до 4,5±0,5 мкг/мл прогнозируют острое течение пиодермий, а при показателях антилизоцимной активности выше 6±0,5 мкг/мл прогнозируют хроническое течение пиодермий.

Для ранней диагностики и прогнозирования течения пиодермий очень важно изучение потенциального возбудителя, находящегося не в очаге поражения, а в около очаговой зоне. То есть учитывать эпитоп, экологическую нишу возбудителя, именно в околоочаговой зоне, так как там у микроорганизма могут быть совсем другие свойства до начала воспалительного процесса. В околоочаговой зоне идет накопление возбудителя с более высокими факторами патогенности. В подтверждение этого утверждения был проведен сравнительный анализ частоты экспрессии факторов патогенности по эпитопам при остром и хроническом течении пиодермий. Если в первом эпитопе как при острой, так и при хронической пиодермии антилизоцимную активность проявляли 30% штаммов, то во втором эпитопе при хроническом течении пиодермии этот показатель составил 64,2±4,1% против 52,1±3,0% при остром течении пиодермии.

Экспрессия свойств возбудителя в самом воспалительном очаге изменяется под воздействием многих факторов: фагоцитоз, лимфоциты, само проявление воспаления. Надо оценивать свойства возбудителя до начала воспалительного процесса.

Существенной особенностью заявляемого способа является использование антилизоцимной активности, но у возбудителя не из очага поражения, а в околоочаговой зоне, где более информативно проявляется этот признак (выше 6 мкг/мл). Кроме того, для исследования берутся штаммы микроорганизмов (S.epidermidis, S.aureus)

Способ осуществляется следующим образом.

Основной задачей, на которую направлен заявляемый способ, является прогнозирование течения пиодермии. Сущностью способа, сформулированной на уровне функционального обобщения и лежащей в его основе, является следующее:

– Выделяют культуру S.aureus и S.epidermidis в околоочаговой зоне. Определяют у выделенных культур уровень антилизоцимной активности. При показателях антилизоцимной активности ниже 4,5±0,5 мкг/мл прогнозируют острое течение пиодермий, при показателях антилизоцимной активности выше 6±0,5 мкг/мл прогнозируют хроническое течение пиодермий.

– Уровень антилизоцимной активности, проявляемой возбудителями в околоочаговой зоне воспаления, служит наиболее информативным параметром, позволяющим осуществить прогнозирование течения кожного инфекционно-воспалительного процесса.

Соответственно при реализации заявляемого способа прогнозирования течения пиодермий характеристика действий, порядка их выполнения представляется следующим образом.

На первом этапе стерильным ватным тампоном, смоченным в стерильном изотоническом растворе хлорида натрия, осуществляют забор исследуемого материала в течение 1 минуты с участка площадью 1 кв.см из трех эпитопов: I – очаг воспаления, II – околоочаговая зона, III – видимо здоровая кожа. Посев материла осуществляется в пробирки на скошенный агар, затем суточные культуры пересевают для идентификации на кровяной и желточно-солевой агар в чашки Петри. Содержание этапа – получение материала для исследования.

На втором этапе происходит определение видового состава полученного материала по биохимическим свойствам согласно определителю бактерий Берги (1980 год). Выделяют информативные штаммы Staphylococcus aureus и Staphylococcus epidermidis из околоочаговой зоны. Содержание этапа – получение индикаторных штаммов.

На третьем этапе исследования определялся уровень антилизоцимной активности выделенных патогенных кокков. Определение антилизоцимного признака микроорганизмов осуществляется чашечным методом. Готовят ряд чашек Петри с питательным агаром, содержащим лизоцим в различных концентрациях (от 0 до 10 мкг/мл). К 9 мл расплавленного 1,5%-го питательного агара (Питательный агар для культивирования микроорганизмов сухой; НПО «Питательные среды», г.Махачкала) добавляют 1 мл раствора лизоцима (ФАО «ФЕРЕЙН», г.Москва) в стерильном изотоническом растворе хлорида натрия. Тщательно высушивают открытые перевернутые чашки Петри в течение 1 часа при температуре 37°С. На поверхность приготовленных сред пятачками засевают исследуемые суточные агаровые культуры микроорганизмов. После инкубации в термостате при заданных режимах выросшие колонии убивают парами хлороформа. Затем сверху на колонии наслаивают 3-4 мл полужидкого агара, смешанного с 0,1 мл взвеси агаровой культуры Micrococcus lisodecticus. Через сутки инкубации в термостате при температуре 37°С проводят учет результатов опыта по наличию роста микрококка вокруг колоний исследуемых культур, инактивировавших концентрацию лизоцима, внесенную в питательную среду. На поверхности и вокруг неактивных культур рост микрококка отсутствует, так как оставшийся в среде лизоцим лизирует индикаторный штамм.

За уровень антилизоцимной активности исследуемых культур принимают максимальное значение концентрации лизоцима в среде, при которой еще наблюдается рост микрококка. Антилизоцимную активность микроорганизмов выражают в микрограммах инактивированного лизоцима. Общая продолжительность этапа составляет 1 сутки. Оценивают полученные данные. При показателях антилизоцимной активности выделенных культур ниже 4,5±0,5 мкг/мл прогнозируют острое течение пиодермий, при показателях антилизоцимной активности выше 6±0,5 мкг/мл прогнозируют хроническое течение пиодермий.

Доказательства эффективности заявляемого способа.

На первом этапе исследования было необходимо выделить наиболее информативные штаммы для проведения исследования. Результаты представлены в таблицах 1 и 2.

Как видно из представленных в таблицах данных, наиболее информативными видами как при остром, так и при хроническом течении пиодермий является Staphylococcus aureus и Staphylococcus epidermidis, так как они достоверно чаще других видов встречаются во втором эпитопе: 20,6-55,0% против 5,0-8,8% при хронической пиодермии, 28,1-45,9% против 4,1-10,0% при острой пиодермии. В связи с этим в заявляемом способе в качестве индикаторных видов были использованы Staphylococcus aureus и Staphylococcus epidermidis.

После определения индикаторных штаммов было необходимо выявить наиболее информативный признак, характерный именно для хронического течения пиодермий. Для достижения этой цели была проведена сравнительная оценка частоты экспрессии факторов патогенности выделенной флоры. Результаты представлены в таблицах 3 и 4.

Как видно из представленных данных, при острой и хронической пиодермиях экспрессия факторов патогенности понижается от очага поражения к видимо здоровой коже. Исключение составила антилизоцимная активность, которая значительно повысилась в околоочаговой зоне. Особенно ярко это свойство проявилось при хроническом течении пиодермии. Необходимо было выяснить, как изменялся уровень антилизоцимной активности при острой и хронической пиодермии.

В связи с этим определили и провели сравнительную характеристику уровней антилизоцимной активности при острой и хронической пиодермии по указанной методике. Результаты представлены в таблице 5.

Как видно из представленных данных, во втором эпитопе определяется существенная разница в уровне антилизоцимной активности у стафиллококков, выделенных у больных с хронической и острой пиодермией. При хронической пиодермии средний уровень антилизоцимной активности составил 6,8 мкг/мл, то есть превышал 6 мкг/мл, что и вошло в формулу изобретения. Средний уровень антилизоцимной активности при острой пиодермии составил 4,5±0,5 мкг/мл, то есть был ниже 6 мкг/мл, что и вошло в основу ведущего отличия заявляемого способа. Средний уровень антилизоцимной активности при хронической пиодермии составил 6,8±1,1 мкг/мл, то есть был выше 6 мкг/мл, что также вошло в основу ведущего отличия заявляемого способа.

Для проверки положительного примера приводим клинические примеры.

Клинические примеры.

Пример 1.

Больная А. 12 лет, обратилась к дерматологу с жалобами на гнойничковые высыпания на коже обеих голеней. Девочка больна 2 дня. При осмотре: Высыпания расположены на коже обеих голеней, представлены в виде пустул до 1 см в диаметре, не сливающихся между собой. Диагноз: Ограниченная пиодермия

Не лечилась. Произведен посев по заявлямому методу. Выделены штаммы S.aureus S.epidermdis. У штаммов определена антилизоцимная активность. Показатель составил 7,8 мкг/мл. Было спрогнозировано хроническое течение пиодермии. Лечение проводилось: антибиотикотерапия, местно: 2% раствор бриллиантовой зелени, эритромициновая мазь на пустулы. При катамнестическом наблюдении: длительность заболевания составила 3 мес, то есть хроническое течение. Прогноз оправдался.

Пример 2.

Больной К. 14 лет, обратился с жалобами на высыпания на коже ног. Ребенок болен около 5 дней. Не лечился. При осмотре: Кожный патологический процесс носит ограниченный симметричный характер. Высыпания расположены на коже голеней и стоп, представлены пустулами до 1,5 см в диаметре, единичными эрозиями, гнойными корками. Диагноз: ограниченная пиодермия

Произведен посев по заявляемому методу. Выделены штаммы S.aureus и S.epidermidis, у которых определена антилизоцимная активность. Показатель составил 3,8 мкг/мл. Было спрогнозировано острое течение пиодермии. Лечение проводилось местно: раствор бриллиантовой зелени и эритромициновая мазь. При катамнестическом наблюдении длительность заболевания составила 17 дней. Прогноз оправдался.

Пример 3.

Больной И. 19 лет, военнослужащий срочной службы в/ч 52236, обратился с жалобами на высыпания на коже ног. Болен около 3 суток. Не лечился.

При осмотре: Кожный патологический процесс носит ограниченный несимметричный характер с преимущественной локализацией на коже правой голени и стопы. Высыпания представлены пустулами до 1,5 см в диаметре.

Произведен посев по заявляемому методу. Выделены штаммы S.aureus и S.epidermidis, у которых определена антилизоцимная активность. Показатель составил 2,8 мкг/мл. Было спрогнозировано острое течение пиодермии. Лечение проводилось местно: смазывание раствором фукорцина. Длительность заболевания составила 10 дней. Прогноз оправдался.

Пример 4.

Больной С. 42 года, военнослужащий в/ч 52236, обратился с жалобами на распространенные высыпания. Болен 7 дней. Занимался самолечением: смазывал гнойнички раствором бриллиантовой зелени: без эффекта.

При осмотре: Кожный патологический процесс носит распространенный симметричный характер с преимущественной локализацией на коже стоп и кистей. Высыпания представлены множественными пустулами до 1,5 см в диаметре, эрозиями, гнойно-геморрагическими корками. Произведен посев по заявляемому способу. Уровень антилизоцимной активности выделенных штаммов составил 6,3 мкг/мл. Было спрогнозировано хроническое течение пиодермии. Лечение проводилось: доксициклина гидрохлорид по 0,1 г 2 раза в сутки в течение 7 дней, местно: раствор фукорцина, эритромициновая мазь. Несмотря на проводимую антибиотикотерапию, длительность заболевания составила 57 дней. Прогноз оправдался.

Заявляемый способ позволяет сделать ранний прогноз развития патологического гнойничкового процесса на коже, что существенно помогает в определении тактики проводимого лечения, следовательно, повышает эффективность терапии, способствует сокращению сроков нетрудоспособности пациентов. Способ применим в ежедневной практике врача-дерматовенеролога.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ:

1. Пронина Е.А. Микробиоценоз кожи детей, находившихся на лечении в условиях гнотобиологической изоляции, Саратовский медицинский университет, автореферат на соискание ученой степени кандидата медицинских наук, Саратов, 1998, с.19.

2. Скрипкин Ю.К. Кожные и венерические болезни. М.: Медицина, 2000.

3. Усвяцов Б.Я. Лизоцимная и антилизоцимная активность патогенных кокков, автореферат на соискание ученой степени доктора медицинских наук, Л., 1986.

Формула изобретения

Способ прогнозирования течения пиодермий, заключающийся в определении показателя микробной обсемененности, отличающийся тем, что из околоочаговой зоны выделяют культуры S.aureus и S.epidermidis, определяют их уровень антилизоцимной активности и при показателях до (4,5±0,5) мкг/мл прогнозируют острое течение пиодермии, а при показателях антилизоцимной активности выше (6±0,5) мкг/мл прогнозируют хроническое течение пиодермии.

MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 18.02.2006

Извещение опубликовано: 20.02.2007 БИ: 05/2007