Патент на изобретение №2251112
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ХЛАМИДИОЗОВ
(57) Реферат:
Изобретение относится к области микробиологии и касается диагностики хламидиозов с помощью реакции специфического лейкоцитолиза. Сущность изобретения состоит в том, что гепаринизированную кровь смешивают с хламидийным антигенным диагностикумом в опытной пробирке с физиологическим раствором в контрольной пробирке, подсчитывают количество лейкоцитов, инкубируют, через 2 часа повторно подсчитывают количество лейкоцитов и расчитывают показатель разрушения лейкоцитов (ПРЛ) и при величине ПРЛ большей или равной 0,2 диагностируют хламидиоз. Техническим результатом является диагностика хламидиоза в более ранние сроки. 5 табл.
Изобретение относится к медицине, в частности к микробиологии, и касается диагностики хламидиозов с помощью реакции специфического лейкоцитолиза (РСЛ). Хламидийная инфекция по распространенности и поражаемому контингенту выходит в настоящее время на одно из первых мест среди других инфекционных заболеваний. Однако клиническая диагностика ее затруднена тем, что около 70% случаев хламидиозов протекают бессимптомно, а если признаки болезни и наблюдаются, то они не носят специфического характера. Поэтому решающее значение для правильной постановки диагноза имеет лабораторная диагностика хламидийной инфекции. Известно, что хламидии являются слабоиммуногенными микроорганизмами и вызывают замедленный низкий гуморальный иммунный ответ. Для его оценки необходимо исследование парных сывороток. В то же время считается, что реакции клеточного иммунитета более чувствительны к воздействию чужеродных антигенов, и с их помощью можно выявлять характерные изменения, начиная со 2-го дня от начала болезни. Целью изобретения является выявление ответа клеточного иммунитета на хламидийную инфекцию в ранние сроки заболевания. Поставленная цель достигается тем, что гепаринизированную кровь смешивают с хламидийным антигеном, подсчитывают в ней количество лейкоцитов, инкубируют при 37°С, через 2 ч вновь определяют количество лейкоцитов и рассчитывают показатель разрушения лейкоцитов (ПРЛ) по формуле. ПРИМЕРЫ КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ Пример 1. Постановка РСЛ у пациента с циститом бактериальной этиологии. Больной М. обратился в медицинское учреждение по поводу цистита. Для установления хламидийной этиологии заболевания ему была выполнена РСЛ. Стерильным шприцем у больного взяли 1 мл крови из локтевой вены и поместили ее в пробирку с 0,1 мл раствора гепарина (5 ЕД/мл крови). Затем по 0,1 мл гепаринизированной крови внесли в 2 пробирки. В 1-ю (опытную) добавили 0,1 мл хламидийного антигена, в качестве которого использовали коммерческий диагностикум для РИГА и РСК, полученный из желточных мешков, инфицированных культурой хламидии. Во 2-ю пробирку вносили 0,1 мл забуференного физиологического раствора рН 7,2-7,4 (контроль). Каждую пробирку встряхивали по 20 сек. Содержимое пробирок набирали в меланжеры до метки 0,5 и далее – 3% уксусную кислоту до метки 11. Меланжеры клали горизонтально. Пробирки помещали в термостат при 37°С на 2 ч. Меланжеры встряхивали 2 мин, первые 3 капли удаляли, заполняли счетную камеру Горяева и устанавливали ее на предметном столике микроскопа. Для определения количества лейкоцитов в 1 мкл реакционной смеси в опытной и контрольных пробах подсчитывали их число в 100 больших квадратах по всей сетке и умножали на 50. Через 2 часа инкубирования пробирки извлекали из термостата и вновь подсчитывали в содержимом из них количество лейкоцитов с помощью меланжеров и камеры Горяева. Реакцию оценивали по показателю разрушения лейкоцитов (ПРЛ), который рассчитывали по формуле: где L01 – количество лейкоцитов в опытной пробирке до инкубации L02 – количество лейкоцитов в опытной пробирке после инкубациии LK1 – количество лейкоцитов в контрольной пробирке до инкубациии LK2 – количество лейкоцитов в контрольной пробирке после инкубациии, и при величине ПРЛ, большей или равной 0,2 диагностируют хламйдиоз. Полученные результаты представлены в таблице 1. Пример расчета:
Величина ПРЛ оказалась меньше значения 0,2, следовательно, у больного хламидийная инфекция отсутствует. При исследовании мочи и соскобов из уретры больного М. прямым методом флуоресцирующих антител антигены хламидий не обнаружены. Пример 2. Постановка РСЛ у больной негонококковым уретритом. Больной З. Для выяснения причины негонококкового уретрита провели РСЛ. Техника постановки реакции подробно описана в примере 1. Полученные результаты представлены в таблице 2.
Значение ПРЛ превышало величину 0,2, поэтому у больной имеются антигены хламидий. Методом флуоресцирующих антител подтверждено присутствие хламидий (C.trachomatis) в соскобах из мочеиспускательного канала. Пример 3. Постановка РСЛ у больного хроническим рецидивирующим бронхитом. Больной С. обратился за медицинской помощью по поводу хронического рецидивирующего бронхита. Кровь пациента исследовали с помощью РСЛ, как описано в примере 1. Результаты обследования представлены в таблице 3.
Величина ПРЛ превысила 0,2, поэтому считали, что у больного имеется хламидийная инфекция. При исследовании мокроты и мазка из зева методом флуоресцирующих антител у больного С.выявлены антигены C.pneumoniae. Пример 4. Постановка РСЛ у больного хроническим рецидивирующим простатитом. Больной П. обратился за медицинской помощью по поводу хронического рецидивирующего простатита. Кровь пациента исследовали с помощью РСЛ, как описано в примере 1. Результаты обследования представлены в таблице 4.
Величина ПРЛ превысила 0,2, поэтому считаем, что у больного имеется хламидийная инфекция. При исследовании сока простаты методом флуоресцирующих антител у больного П. выявлены антигены C.trachomatis. Пример 5. Постановка РСЛ у больного хроническим рецидивирующим конъюнктивитом. Больной К. обратился за медицинской помощью по поводу хронического рецидивирующего конъюнктивита. Кровь пациента исследовали с помощью РСЛ, как описано в примере 1. Результаты обследования представлены в таблице 5.
Величина ПРЛ превысила 0,2, указывающая, что у больного имеется хламидийная инфекция. При исследовании мазка с конъюнктивы методом флуоресцирующих антител у больного К. выявлены антигены C.trachomatis. Таким образом, стало возможным выполнять диагностику хламидиоза в ранние сроки заболевания по величине ПРЛ. Предлагаемый способ диагностики хламидиозов прост, доступен, не трудоемок, не требует повторного исследования крови больного и позволяет выявлять наличие хламидийной инфекции. Рекомендуется использовать как дополнительный тест в комплексной диагностике хламидиозов.
Формула изобретения
Способ диагностики хламидиозов путем исследования крови больного, отличающийся тем, что 0,1 мл гепаринизированной крови смешивают с 0,1 мл хламидийного антигенного диагностикума в опытной пробирке с 0,1 мл физиологического раствора в контрольной пробирке, подсчитывают количество лейкоцитов, инкубируют в термостате при 37°С, через 2 ч повторно подсчитывают количество лейкоцитов и расчитывают показатель разрушения лейкоцитов (ПРЛ) по формуле: где L01 – количество лейкоцитов в опытной пробирке до инкубации; L02 – количество лейкоцитов в опытной пробирке после инкубации; LK1 – количество лейкоцитов в контрольной пробирке до инкубации; LK2 – количество лейкоцитов в контрольной пробирке после инкубации, и при величине ПРЛ, большей или равной 0,2, диагностируют хламидиоз.
MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Дата прекращения действия патента: 31.07.2005
Извещение опубликовано: 27.01.2007 БИ: 03/2007
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
