Патент на изобретение №2250908

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МАКРОЛИДНОГО АНТИБИОТИКА ТИЛОЗИНА

(57) Реферат:

Изобретение относится к способу получения макролидного антибиотика широкого спектра действия – тилозина. Способ включает осаждение тилозина из органического концентрата тилозина основания с использованием органического растворителя – гексана. Осаждение осуществляют добавлением органического концентрата тилозина основания к органическому растворителю – гексану. Скорость приливания органического концентрата составляет от 3 до 5 мл в минуту на каждые 50 мл концентрата. Технический результат – получение тилозина основания в виде гранул, однородных по составу. 1 з.п. ф-лы.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа получения макролидного антибиотика – тилозина, обладающего широким антибактериальным спектром действия и низкой токсичностью. Тилозин используется для лечения микоплазмов, дизентерии, атрофического ринита и других заболеваний у сельскохозяйственных животных и птиц.

Известен способ получения тилозина основания /Патент US 4568740, С 07 Н 17/08 Е 33/ – аналог, согласно которому для осаждения тилозина основания используют органический растворитель, в котором тилозин не растворяется, в частности циклогексан, и осуществляют осаждение путем приливания циклогексана к хлористометиленовому концентрату тилозина основания.

Данный способ имеет следующие недостатки.

1. При приливании осадителя – циклогексана к хлористометиленовому концентрату тилозина основания происходит осмоление, в результате чего получается смолообразная, мелкодисперсная суспензия тилозина, что затрудняет процессы фильтрации полученной смолообразной, мелкодисперсной массы и сушки готового препарата.

2. Тилозина основание получается в виде аморфного порошка с размером частиц от 20 до 40 мкм с вкраплениями смолы, содержание активного вещества составляет 95%.

По способу прототипа /Тадеуш Кожыбски, Антибиотики, т.1, Варшава, 1969, с, 58/ к органическому хлороформенному концентрату тилозина основания при перемешивании медленно добавляют гексан с получением сырца тилозина основания, который подвергают дальнейшей очистке, заключающейся в растворении полученного препарата в ацетоне и постепенном добавлении к полученному ацетоновому концентрату 10 объемов воды для кристаллизации тилозина основания.

Способ по прототипу имеет следующие недостатки.

1. При приливании осадителя – гексана к хлороформенному концентрату тилозина основания происходит осмоление, в результате чего получается смолообразная, мелкодисперсная суспензия тилозина, что затрудняет процессы фильтрации полученной смолообразной массы и сушки препарата.

2. Тилозина основание получается в виде аморфного порошка с вкраплениями смолы.

3. Для получения однородного по составу препарата, без вкрапления смолы, проводят водно-ацетоновую перекристаллизацию, что сопряжено с дополнительными затратами на ацетон и его регенерацию и приводит к дополнительным потерям целевого препарата. В результате перекристаллизации получают препарат с размером частиц от 30 до 60 мкм, содержание активного вещества 96%.

Целью заявляемого способа является получение препарата в виде гранул, однородных по составу.

Поставленная цель достигается тем, что предлагается измененный порядок смешения компонентов среды при осаждении, заключающийся в приливании органического концентрата тилозина основания к осадителю – гексану со скоростью приливания от 3 до 5 мл в минуту на каждые 50 мл органического концентрата тилозина основания.

По ходу приливания органического концентрата тилозина основания к осадителю – гексану происходит быстрое образование гранул тилозина основания, без захватывания органического растворителя (хлороформа, бутилацетата, хлористого метилена) внутрь гранул, что позволяет предотвратить осмоление и получить препарат в виде гранул, однородных по составу.

Органический концентрат представляет собой тилозина основание в растворенном виде в среде ряда органических растворителей, не смешивающихся с водой (бутилацетат, хлороформ, хлористый метилен), с активностью от 50000 до 100000 ЕД/мл. По заявляемому способу органический концентрат тилозина основания получают следующим образом.

1. Первая экстракция из нативного раствора (отфильтрованная культуральная жидкость) органическим растворителем (бутилацетат, хлороформ, хлористый метилен) с получением органического экстракта тилозина основания с активностью от 10000 до 20000 ЕД/мл.

2. Реэкстракция раствором винной кислоты с получением виннокислого реэкстракта с активностью от 20000 до 40000 ЕД/мл.

3. Вторая экстракция органическим растворителем (бутилацетат, хлороформ, хлористый метилен) из полученного винно-кислого реэкстракта с получением органического концентрата тилозина основания с активностью от 50000 до 100000 ЕД/мл.

Возможно получение органического концентрата тилозина основания следующим образом.

1. Как описано в примерах 1 и 4 патента US 4568740 с использованием ионообменной смолы и концентрирования хлористометиленового экстракта в вакууме.

2. По способу прототипа путем концентрирования хлороформенного экстракта на колонке с активированным углем.

Отличительные признаки заявляемого способа

1. Осаждение тилозина основания осуществляют путем приливания органического концентрата тилозина основания к осадителю – гексану.

2. Скорость приливания органического концентрата тилозина основания составляет от 3 до 5 мл в минуту на каждые 50 мл концентрата.

3. Тилозина основание получается в виде гранул, однородных по составу, размером от 90 до 100 мкм.

Заявляемый способ обеспечивает

1. Получение тилозина основания в виде гранул, однородных по составу, размером от 90 до 100 мкм, что обеспечивает:

1.1 Удовлетворительную фильтруемость суспензии тилозина без “проскока” препарата через фильтрующую перегородку за счет отсутствия мелких частиц и смолы.

1.2 Удовлетворительный процесс сушки препарата.

2. Снижение себестоимости препарата за счет исключения стадии водно-ацетоновой перекристаллизации.

Примеры осуществления способа

Пример 1

К 150 мл гексана при перемешивании добавляют 50 мл бутилацетатного концентрата тилозина основания с активностью 50000 ЕД/мл со скоростью 5 мл в минуту. Реакционную смесь выдерживают при температуре от 10 до 15°С в течение 3 часов, после чего осадок тилозина основания отделяют фильтрацией, промывают его гексаном и высушивают в вакууме при 40°С в течение 4 часов. Получают 4,75 г тилозина основания в виде однородных гранул размером от 90 до 100 мкм, содержание активного вещества 98%.

Пример 2

К 150 мл гексана при перемешивании добавляют 50 мл хлористометиленового концентрата тилозина основания с активностью 100000 ЕД/мл со скоростью 5 мл в минуту. Реакционную смесь выдерживают при температуре от 10 до 15°С в течение 3 часов, после чего осадок отделяют фильтрацией, промывают его гексаном и высушивают в вакууме при температуре 40°С в течение 4 часов. Получают 4,8 г тилозина основания в виде однородных гранул размером от 90 до 100 мкм, содержание основного вещества 98,5%.

Пример 3

К 150 мл гексана при перемешивании добавляют 50 мл хлороформенного концентрата тилозина основания с активностью 75000 ЕД/мл со скоростью 5 мл в минуту. Реакционную смесь выдерживают при температуре от 10 до 15°С в течение 3 часов, после чего осадок отделяют фильтрацией, промывают его гексаном и высушивают в вакууме при температуре 40°С в течение 4 часов. Получают 4,9 г тилозина основания в виде однородных гранул размером от 90 до 100 мкм, содержание активного вещества 98%.

Пример 4

Аналогичен примеру 1, но скорость приливания бутилацетатного концентрата тилозина основания составляет 3 мл в минуту.

Пример 5

Аналогичен примеру 2, но скорость приливания хлористометиленового концентрата тилозина основания составляет 3 мл в минуту.

Пример 6

Аналогичен примеру 3, но скорость приливания хлороформенного концентрата тилозина основания составляет 3 мл в минуту.

Формула изобретения

1. Способ получения тилозина основания, включающий осаждение тилозина из органического концентрата тилозина основания с использованием для осаждения тилозина основания органического растворителя – гексана, отличающийся тем, что осаждение осуществляют добавлением органического концентрата тилозина основания к органическому растворителю – гексану.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что скорость приливания органического концентрата тилозина основания к гексану составляет от 3 до 5 мл в минуту на каждые 50 мл концентрата.