Патент на изобретение №2250461
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
(54) СПОСОБ ИССЛЕДОВАНИЯ АГРЕГАЦИИ ТРОМБОЦИТОВ У БОЛЬНЫХ АРТЕРИАЛЬНОЙ ГИПЕРТОНИЕЙ С МЕТАБОЛИЧЕСКИМ СИНДРОМОМ
(57) Реферат:
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике. Сущность способа исследования агрегации тромбоцитов у больных артериальной гипертонией с метаболическим синдромом заключается в следующем: исследование агрегации тромбоцитов проводят на стекле одновременно с несколькими индукторами, используя минимальные взаимопотенцирующие концентрации индукторов агрегации, которые составляют при двойном сочетании индукторов: АДФ – 5,0·10-8 М, адреналин 3,0·10-9, коллаген – разведение основной суспензии 1:8, тромбин 0,075 ед/мл; при тройном сочетании индукторов: АДФ – 10-9 М, адреналин 10-9, коллаген – разведение основной суспензии 1:9, тромбин 0,060 ед/мл. Развитие агрегации говорит об активации тромбоцитов у больных артериальной гипертонией с метаболическим синдромом. Способ позволяет оценивать изменения функционального состояния тромбоцитов с комбинацией индукторов, наиболее вероятно присутствующей в зоне повреждения сосуда, используя минимальные необходимые концентрации, что моделирует реальные условия при инициации гемостаза в сосудах человека. 2 табл., 3 ил.
(56) (продолжение): CLASS=”b560m”мозгового кровообращения. Кровообращение. 1988, №4, с. 47-49. БАЛУДА В.П. и др. Метод определения антиагрегационной активности стенки сосудов человека. Лабораторное дело. 1983, №6, с. 17-20. БАЛУДА В.П. и др. Лабораторные методы исследования системы гемостаза. Томск, 1980, с. 314. RU 2138054 С1, 20.09.1999. SU 1801211 А3, 07.03.1993. МЕНЬШИКОВ В.В. и др. Лабораторные методы исследования в клинике. Справочник. М., Медицина, 1989, с. 152-154.
Изобретение относится к биологии и медицине в области гематологии и может быть использовано для оценки агрегации тромбоцитов в условиях, приближенных к внутрисосудистым, с целью выявления активации тромбоцитов у больных артериальной гипертонией с метаболическим синдромом. Наиболее близким к предложенному является способ определения агрегации тромбоцитов на предметном стекле с использованием одного индуктора (Шитикова А.С. Визуальный микрометод исследования агрегации тромбоцитов. В кн.: Гемостаз. Физиологические механизмы, принципы диагностики основных форм геморрагических заболеваний. Под ред. Н.Н.Петрищева, Л.П.Папаян, СПб.: 1999. – С.49-52. Описанный метод не позволяет моделировать реальные условия агрегации тромбоцитов в организме человека и при его проведении не предусмотрено использование минимальной взаимопотенциирующей концентрации индукторов агрегации. Цель изобретения: с помощью технически простых, экономически доступных и быстро выполнимых приемов оценивать изменения функционального состояния тромбоцитов в малом объеме плазмы с комбинацией индукторов, наиболее вероятно присутствующей в зоне повреждения сосуда. Сущность заявляемого способа заключается в том, что после взятия крови, ее стабилизации цитратом натрия 3,8%, разделения крови на плазму и эритроциты путем центрифугирования с получением богатой тромбоцитами плазмы (БТП) и проводится на предметном стекле тест на агрегацию тромбоцитов с несколькими индукторами. Визуальная оценка агрегации тромбоцитов в этих условиях позволяет с небольшим объемом (0,02 мл) плазмы и малым объемом индукторов (общий объем 0,02 мл) моделировать реальные условия кровотока у людей и оценить изменения функционального состояния тромбоцитов на минимальные взаимопотенциирующие концентрации индукторов. Заявляемый способ осуществляется следующим образом. После взятия крови в цитрат натрия 3,8% в соотношении 9:1, ее центрифугируют в течение 5 мин при 1000 об/мин, для получения БТП. Часть плазмы отбирают, а оставшуюся центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 мин, получая бедную тромбоцитами плазму (БеТП). БТП стандартизируют по числу тромбоцитов путем разбавления исходной БТП аутологичным образцом БеТП (до 200·109/л). Из получившегося объема стандартизированной плазмы отбирают из расчета по 0,02 мл плазмы на каждую исследуемую комбинацию индукторов. Оставшийся объем плазмы можно использовать для других гематологических и биохимических исследований. Из отобранного объема стандартизированной плазмы на предметное стекло наносят 0,02 мл плазмы и разными пипетками растворы нескольких индукторов в минимальных взаимопотенциирующих концентрациях (фиг.1 и 2) общим объемом, равным объему плазмы. Объемы агонистов определяются по формуле: где n – число используемых одновременно индукторов агрегации (фиг.1 и 2). В качестве агонистов возможно использование аденозин дифосфата (АДФ), коллагена, тромбина, адреналина и других индукторов. Минимальные взаимопотенциирующие дозы индукторов всегда ниже стандартных (табл.1 и 2). Стеклянной палочкой смешивают плазму с индукторами так, чтобы жидкость занимала окружность диаметром около 2 см (фиг.3). Покачивая стекло круговыми движениями в проходящем свете осветителя, на черном фоне следят через лупу за возникновением агрегатов. При появлении отчетливых агрегатов, просветлении раствора и прилипании части агрегатов фиксируют агрегацию тромбоцитов. Необходимо отметить, что исследование агрегационной способности кровяных пластинок с несколькими индукторами моделирует события, происходящие в кровотоке в области повреждения сосуда и инициации процесса гемостаза, т.к. реально в этих условиях тромбоциты активируются несколькими агонистами. Например, у больных артериальной гипертонией с метаболическим синдромом часто найденные закономерности выражены еще больше, чем у здоровых людей из-за активации тромбоцитарных функций.
Из таблиц 1 и 2 следует, что минимальные вызывающие агрегацию дозы индукторов при сочетаном их использовании значительно ниже, чем в стандартных условиях при использовании воздействия на тромбоциты одного агониста. При одновременном присутствии в БТП трех индукторов, дозы, требующиеся для агрегации, еще ниже, чем в случае двух индукторов. Причем, у больных артериальной гипертонией с метаболическим синдромом эти значения еще ниже, что говорит о выраженной у них активации тромбоцитов. Одномоментное применение нескольких индукторов приближает наши представления о необходимой минимальной концентрации индукторов в реальных условиях при инициации гемостаза в сосудах человека. Пример 1. Гражданка Н., 31 год, поступила для санаторно-курортного лечения в санаторий им. И.Д.Черняховского г. Курска. При осмотре и объективном обследовании патологических изменений не было выявлено. Утром натощак было произведено взятие крови для биохимического и гематологического исследования, не выявившего отклонений от общепринятой нормы. Агрегация тромбоцитов с АДФ, коллагеном, тромбином, ристомицином, H2O2 и адреналином оказалась в пределах нормы. Оценка агрегации кровяных пластинок в стандартизированной по количеству тромбоцитов плазме (200·1009 тр/л) с комбинацией индукторов АДФ + адреналин, АДФ + коллаген, адреналин + коллаген, АДФ + коллаген + адреналин и АДФ + коллаген + тромбин зафиксировала ее развитие. Минимальные взаимопотенциирующие концентрации при использовании двух индукторов составили для АДФ – 10-6 М., коллагена – 1:4 разведение основной суспензии, адреналина – 2,5·10-7 М., для тромбина – 0,100 ед/мл. При одновременном применении трех индукторов минимальная взаимопотенциирующая концентрация составила для АДФ – 5,0·10-7 М., коллагена 1:5 разведения основной суспензии, адреналина – 10-7 М., тромбина – 0,090 ед/мл. Более низкие концентрации индукторов не вызывали у обследованной агрегации тромбоцитов. Таким образом, развитие агрегации тромбоцитов в ответ только на взаимопотенциирующие дозы индукторов, характерные для здоровых людей, свидетельствуют о нормальной функции тромбоцитов у обследованной. Пример 2. Больная Б., 53 года, находящаяся на диспансерном учете по артериальной гипертонии в поликлинике МУЗ ГБ СМП г. Курска и имеющая в качестве сопутствующей патологии метаболический синдром, обследована в плановом порядке. При опросе выявлены жалобы на эпизодические головные боли в затылочной области, мелькание “мушек” перед глазами, связанные с подъемами артериального давления. Больная также предъявляла жалобы на избыточную массу тела с локализацией жира преимущественно на животе. При объективном осмотре выявлено ожирение по андроидному типу II а ст. и смещение левой границы сердца влево на 1,5 см. Электрокардиографически выявлено наличие у пациентки гипертрофии левого желудочка. Окулист диагносцировал у больной гипертоническую ангиопатию сетчатки. Лабораторное обследование выявило у нее нарушение толерантности к глюкозе, гиперлипидемию IIб типа с легкой гиперхолестеринемией (5,8 ммоль/л). Агрегация тромбоцитов инициировалась у больной с комбинацией индукторов: АДФ + адреналин, АДФ + коллаген, адреналин + коллаген, АДФ + коллаген + адреналин, АДФ + коллаген + тромбин. Минимальная взаимопотенциирующая агрегацию концентрация в случае двух индукторов составила для АДФ – 5·10-8 М., коллагена – 1:8 разведения основной суспензии коллагена, адреналина – 3,0·10-9 М., тромбина – 0,075 ед/мл. В случае одновременного использования трех индукторов их минимальная концентрация была ниже. Для АДФ – 10-9 М., для коллагена – 1:9 разведения основной суспензии, адреналина – 10-9 М., тромбина – 0,060 ед/мл. Развитие агрегации тромбоцитов с такими минимальными взаимопотенциирующими дозами индукторов указывает на нарушение (активацию) агрегационной функции тромбоцитов. Больной была назначена адекватная гипотензивная терапия диротоном 10 мг 1 раз в сутки, индивидуально подобранная гипокалорийная диета и дозированные физические тренировки. Это позволило через 3 мес лечения привести минимальные взаимопотенциирующие дозы индукторов до уровня здоровых людей, нормализовав тем самым агрегацию тромбоцитов. Пример 3. Больная С., 60 лет, находящаяся на диспансерном учете по артериальной гипертонии в поликлинике № 7 г. Курска и имеющая в качестве сопутствующей патологии метаболический синдром, обследована в плановом порядке. При осмотре выявлено, что больная регулярно принимает подобранную гипотензивную терапию (амлодипином 5 мг 1 раз в сутки и диротоном 10 мг 1 раз в сутки), что обеспечивает стабильность артериального давления в пределах нормальных цифр. На момент осмотра жалоб у больной выявлено не было. При объективном осмотре выявлено ожирение по андроидному типу IIа ст. и смещение левой границы сердца влево на 1,0 см. Электрокардиографически выявлено наличие у пациентки гипертрофии левого желудочка. Окулист диагносцировал у больной гипертоническую ангиопатию сетчатки. Лабораторное обследование выявило у нее нарушение толерантности к глюкозе, гиперлипидемию IIб типа с легкой гиперхолестеринемией (5,6 ммоль/л). Агрегация тромбоцитов с комбинацией индукторов у пациентки не имела отклонений от нормы. Сочетание индукторов: АДФ + адреналин, АДФ + коллаген, адреналин + коллаген, АДФ + коллаген + адреналин, АДФ + коллаген + тромбин вызывали агрегацию тромбоцитов при минимальных взаимопотенциирующих агрегацию концентрациях в случае двух индукторов АДФ – 10-6 М., коллагена – 1:4 разведения основной суспензии коллагена, адреналина – 2,5·10-7 М., тромбина – 0,100 ед/мл., в случае трех индукторов: АДФ – 5·10-7 М., для коллагена – 1:5 разведения основной суспензии, адреналина – 10-7 М., тромбина – 0,090 ед/мл. Более низкие концентрации индукторов не вызывали у обследованной агрегации тромбоцитов. Таким образом, развитие агрегации тромбоцитов в ответ только на взаимопотенциирующие дозы индукторов, характерные для здоровых людей, свидетельствуют о нормальной функции тромбоцитов у обследованной. Больной было рекомендовано продолжать строго контролировать артериальное давление и снизить массу тела за счет соблюдения гипокалорийной диеты и физических тренировок.
Формула изобретения
Способ исследования агрегации тромбоцитов на стекле, включающий взятие крови, ее стабилизацию, выделение богатой тромбоцитами плазмы и нанесение ее на предметное стекло, добавление индуктора агрегации, отличающийся тем, что у больных артериальной гипертонией с метаболическим синдромом исследуют агрегацию тромбоцитов одновременно с несколькими индукторами, используя минимальные взаимопотенцирующие концентрации индукторов агрегации, которые составляют при двойном сочетании индукторов АДФ – 5,0·10-8 М, адреналин 3,0·10-9, коллаген – разведение основной суспензии 1:8, тромбин 0,075 ед/мл; при тройном сочетании индукторов АДФ – 10-9 М, адреналин 10-9, коллаген – разведение основной суспензии 1:9, тромбин 0,060 ед/мл, развитие агрегации говорит об активации тромбоцитов у больных артериальной гипертонией с метаболическим синдромом.
РИСУНКИ
MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Дата прекращения действия патента: 20.03.2009
Извещение опубликовано: 27.03.2010 БИ: 09/2010
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
