Патент на изобретение №2249615

(54) ШТАММ CLOSTRIDIUM CELLOBIOPARUM, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ПРИ ПОЛУЧЕНИИ ПРОБИОТИКА ДЛЯ ЖВАЧНЫХ ЖИВОТНЫХ

(57) Реферат:

Изобретение относится к биотехнологии, касается производства пробиотиков и может быть применено в животноводстве. Штамм Clostridium cellobioparum КЭМ-537 выделен из доминирующей микрофлоры рубца коров, идентифицирован с применением традиционных микробиологических методов, хранится в коллекции музея чистых культур микроорганизмов Вологодской государственной молочно-хозяйственной академии им. Н.В. Верещагина. Штамм Clostridium cellobioparum КЭМ-537 ферментирует сложные полисахариды корма, активизирует процессы пищеварения, усвоения питательных веществ, синтеза летучих жирных кислот, оказывающих положительное влияние на молочную продуктивность коров. Количество жизнеспособных клеток достигает 10⁹-10¹⁰ в 1 г препарата, полученного на основе штамма.

Изобретение относится к микробиологической промышленности, биотехнологии, производству пробиотиков и может применяться в животноводстве.

В литературных источниках сообщалось о значении и выделении из рубца жвачных животных в чистую культуру бактерий рода Clostridium, разлагающих сложные полисахариды. Однако сведений об использовании их в производстве пробиотиков не представлено [1].

Известен штамм Lactobacillus acidophilus var. coccoideus M-86, сбраживающий крахмал, используемый при производстве пробиотика Руменолакта для жвачных животных [2].

Целью изобретения является получение нового штамма Cl. cellobioparum КЭМ-537, обладающего способностью разлагать целлюлозу, крахмал, которые составляют основную часть корма жвачных животных.

Штамм выделен из доминантной микрофлоры рубца коров и характеризуется следующими признаками.

Морфологические и культуральные свойства

Клетки имеют форму палочек размером 0,8×7 мкм, располагаются единично, образуют споры, расположенные терминально, грамположительны, подвижны. Культивирование штамма проводят на агаризованной среде Омелянского следующего состава, г/л: KNH₄HPO₄ 0,2; КН₂РO₄ 0,1; СаСl₂ 0,03; пептон 0,1; MgSO₄ 0,05; СаСО₃ 0,5; фильтровальная бумага 20,0; агар 20,0.

Посевы инкубируют при (34±1)°С в течение 24-36 ч в анаэробных условиях. На питательной среде образуются колонии бежевого цвета глубинные диаметром 1-2 мм. В жидкой среде того же состава образуют равномерную муть или слабый осадок.

Физиолого-биохимические свойства штамма

Анаэроб. Не разжижает желатину, не образует лецитиназу, уреазу, липазу, сероводород. Сбраживает: целлюлозу, крахмал, целлобиозу, глюкозу, маннит, лактозу, дульцит, фруктозу, галактозу, сахарозу, трегалозу, ксилозу, рибозу, мальтозу, маннозу, мелибиозу. Оптимальная температура роста 30-37°С, растет при 10°С, выдерживает кипячение.

Значение рН 6,8-7,0. Штамм непатогенен, токсичных и токсигенных свойств не проявляет.

Штамм хранят на вязкой питательной среде с внесением 0,15% агара в анаэробных условиях при температуре (4±2)°С.

Пример 1.

Выращивание штамма ведут при температуре(34±1)°С в течение 16-18 ч на среде следующего состава, г/л: КН₂РO₄ 0,4; MgSO₄ 0,04; NaCl 0,6; (NH₄)₂SO₄ 0,9; микрокристаллическая целлюлоза 1,4; молочная сыворотка до 1 л; рН 6,8-7,0. Питательную среду стерилизуют при 1 атм (121±1)°С в течение 20 мин. Готовую среду охлаждают до (34±1)°С и инокулируют суточной культурой Clostridium cellobioparum КЭМ-537 1-5% к объему среды.

После окончания процесса ферментации полученный продукт используют для приготовления пастообразного или сухого препарата.

Пример 2.

Пасту готовят путем центрифугирования культуральной среды. Бактериальную массу смешивают с сывороточным концентратом (заявка №2000125930 от 26.04.01) в соотношении 1:10-1:12, получая количество жизнеспособных клеток 10⁹-10¹⁰ в 1 г.

Пример 3.

Сухой препарат получают, смешивая биомассу с адсорбентом в соотношении 1:10. В качестве адсорбента могут быть использованы мука, крахмал, глюкоза, сухая молочная сыворотка. Количество живых микробных клеток достигает 10⁹-10¹⁰ в 1 г препарата.

Бакпрепарат применяют в качестве биологически активной кормовой добавки для коров.

Штамм Cl. cellobioparum КЭМ-537 обладает высокой ферментативной активностью расщепления полисахаридов, способствует усилению пищеварительных процессов, усвоению питательных веществ корма, синтезу летучих жирных кислот, которые служат основными источниками энергии жвачных животных и являются предшественниками составных частей молока.

Источники информации

1. Пивняк И.Г., Тараканов Б.В. Микробиология пищеварения жвачных. – М.: Колос, 1982, 247 с.

2. Патенты РФ №2154102 С2, 1993; №1541250 A1, 1990.

Формула изобретения

Штамм Clostridium cellobioparum КЭМ-537, используемый при получении пробиотика для жвачных животных, находится в коллекции музея чистых культур микроорганизмов Вологодской государственной молочно-хозяйственной академии им. Н.В. Верещагина.

MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 21.02.2006

Извещение опубликовано: 20.02.2007 БИ: 05/2007