Патент на изобретение №2153170

(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СИНДРОМА ИНСУЛИНОРЕЗИСТЕНТНОСТИ

(57) Реферат:

Изобретение относится к области медицины, а именно к способам диагностики патологических состояний, и может быть применено для диагностики синдрома инсулинорезистентности. Способ включает выделение лимфоцитов, в которых методом газожидкостной хроматографии определяют жирно-кислотный состав, затем рассчитывают отношение процентного содержания насыщенных жирных кислот к ненасыщенным и при значении этого показателя 0,45 диагностируют синдром инсулинорезистентности. Технический результат изобретения – повышение точности и достоверности диагностики.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способам диагностики патологических состояний, и может быть применено для диагностики синдрома инсулинорезистентности (метаболического синдрома X).

Собственно инсулинорезистентность – это первичное, селективное и специфичное нарушение биологического действия инсулина, сопровождающееся снижением потребления глюкозы тканями (преимущественно скелетными мышцами) и приводящее к хронической компенсаторной гиперинсулинемии [Зимин Ю.В. Происхождение, диагностическая концепция и клиническое значение синдрома инсулинорезистентности или метаболического синдрома. Кардиология, 1998; 6: 71-81; Herrera Pombo J. L. Гиперинсулинемия и риск сердечно-сосудистых заболеваний. Диабетография, 1995; 3:19-21].

Вместе с тем, нельзя ставить знак равенства между понятием метаболического синдрома и компонентами, входящими в его состав.

Таким образом, понятие метаболического синдрома X включает в себя артериальную гипертензию, но не является ее синонимом. Синдром инсулинорезистентности – это самостоятельная патология, приводящая к различным неблагоприятным изменениям в организме, в том числе и к артериальной гипертензии. В связи с этим и подходы к диагностике метаболического синдрома X должны быть направлены не на выявление отдельных составляющих синдрома и в частности артериальной гипертензии, а на доказательство наличия инсулинорезистентности, как первопричины метаболического синдрома.

Еще одним “маркером” метаболического синдрома является абдоминальный тип ожирения, обусловленный инсулинорезистентностью. Однако, развитие ожирения может быть связано не только с инсулинорезистентностью, но и с целым рядом других этиологических факторов [Клиническая эндокринология: Руководство / Под род. Старковой Н.Т. – М.: Медицина, 1991. – С.512].

Таким образом, полиэтиологичность заболеваний, являющихся компонентами синдрома инсулинорезистентности, возможность отсутствия ряда его составляющих у инсулинрезистентных лиц, наличие скрытых форм этого синдрома и отсроченность во времени появления клинических симптомов после развития инсулинорезистентности, значительно затрудняют диагностику метаболического синдрома по клиническим критериям и делают его несвоевременной.

Вместе с тем, чрезвычайно актуальным является ранняя диагностика синдрома инсулинорезистентности, поскольку именно на ранних этапах развития этого состояния возможно его эффективное и безопасное лечение. Формирование таких осложнений метаболического синдрома, как ишемическая болезнь сердца, артериальная гипертензия, сахарный диабет II типа, абдоминальное ожирение, атеросклероз сосудов нижних конечностей и т.д. значительно ограничивает возможности применения аэробных физических нагрузок, специальных диет и метформина, обычно использующихся для лечения синдрома инсулинорезистентности.

В связи с этим для диагностики синдрома инсулинорезистентности в настоящее время используется ряд методик: эугликемический гиперинсулинемический клэмп-тест, пероральный и внутривенный тесты на толерантность к глюкозе, определение концентрации в крови иммунореактивного инсулина и C-пептида.

Анализируя возможность применения в клинической практике перорального и внутривенного тестов на толерантность к глюкозе, Майоров А.Ю. указывает на наличие у них ряда существенных недостатков:
1. Снижение концентрации глюкозы в ходе теста происходит в результате действия как экзогенного, так и эндогенного инсулина, величина секреции которого не известна;
2. Скорость снижения гликемии зависит не только от утилизации глюкозы периферическими тканями, но и от величины продукции глюкозы печенью, которую не определяют в ходе теста;
3. Результаты пробы во многом зависят от исходного уровня гликемии, что затрудняет сравнение данных у разных лиц и даже у одного лица в динамике;
4. При концентрации глюкозы в крови, превышающей почечный порог, на скорость снижения гликемии влияет и величина глюкозурии:
5. Во время исследования может развиться гипогликемия, которая приводит к выбросу контринсулярных гормонов, изменяющих чувствительность к инсулину [Майоров А.Ю. Оценка функциональной активности инсулярного аппарата, периферической чувствительности и кинетики глюкозы у больных с впервые выявленным инсулиннезависимым сахарным диабетом. Диссертация канд. мед. наук М., 1996, с. 120].

Temple R. et al. сообщают о том, что имеющиеся различия в уровнях инсулина в плазме натощак между разными лабораториями указывают на неточность методов в радиоиммунном анализе. Эта неточность может быть связана с несколькими причинами:
– различия при приготовлении стандартных образцов и антисывороток;
– адсорбция инсулина на стенках стеклянных и пластиковых пробирок;
– гемолиз;
– нестабильность инсулина в плазме.

Вместе с тем, увеличение уровня C-пептида является прежде всего критерием нарушения метаболизма углеводов, тогда как инсулинорезистентность, как отмечалось выше, может приводить к расстройствам липидного, пуринового, электролитного обменов, а также формированию артериальной гипертензии. При этом последовательность формирования этих нарушений трудно предсказуема. Это ограничивает использование C-пептида на ранних этапах развития инсулинорезистентности, до формирования нарушения углеводного обмена. В результате, использование для диагностики инсулинорезистентности C-пептида не позволяет выявлять все случаи синдрома инсулинорезистентности.

Целью настоящего изобретения является повышение точности, достоверности и достижение возможности ранней диагностики синдрома инсулинорезистентности, а также расширение круга лиц, у которых возможно проведение диагностики синдрома инсулинорезистентности

Способ осуществляется следующим образом. Больному натощак производят забор 30 мл крови из кубитальной или другой периферической или центральной вены самотеком в пробирку, содержащую 15 мл полюглюкина и 50 ЕД гепарина. Из полученной крови выделяют лимфоциты по методике Новикова Д.К., Новиковой В. И. [Новиков Д.К. и Новикова В.И. Оценка иммунного статуса. / Москва-Витебск, Медицина, 1996, С.265]. Для этого пробирку устанавливают в штатив и отстаивают при комнатной температуре в течение 40 минут. После чего пипеткой снимается 15 мл надосадочной жидкости и наслаивается по стенке пробирки на 10 мл смеси фикола и верографина плотностью 1,77. Затем эту смесь центрифугируют при 1500 об/мин в течение 30 минут. После чего пастеровской пипеткой отбирают кольцо лимфоцитов и помещают лимфоциты в другую пробирку для отмывания. В эту пробирку добавляют физиологический раствор натрия хлорида в соотношении 3 : 1 (3 части физ. раствора и 1 часть лимфоцитов). Пробирку устанавливают в центрифугу и центрифугируют при 1500 об/мин в течение 10 минут. Затем физиологический раствор сливают, а лимфоциты остаются на дне пробирки. Лимфоциты заливают 2 мл однонормального спиртового раствора KOH.

Жирнокислотный состав лимфоцитов определяют методом газожидкостной хроматографии [Краснов В.П., Гонцова С.А. Применение газовой хроматографии для идентификации микрофлоры у больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки/ Фундаментальные науки в хирургии / Под редакцией В.И. Русакова. – Ростов-на-Дону. – Изд-во СКНЦ ВШ, 1993. -c.91]. Данным методом идентифицируется 29 высших жирных кислот, состав которых имеет следующие количества углеродных атомов и число непредельных связей (C_n:m): C_10:0; C_11:0; C_12:0; C_12:1; C_13:0; C_14:0; C_14:1; C_15:0; C_15:1; C_16:0; C_16:1; C_17:0; C_18:0; C_18:1; C_18:2; C_18:3; C_19:0; C_20:0; C_20:1; C_20:2; C_20:3; C_20:4; C_22:0; C_22:1; C_22:6.

По хроматограмме определяется процентный состав каждой кислоты, входящей в состав лимфоцитов с использованием следующей формулы:

Затем рассчитывают отношение процентного содержания насыщенных жирных кислот к ненасыщенным:

где m’1.

Обследовано 32 человека в возрасте от 25 до 56 лет, без клинических проявлений синдрома инсулинорезистентности. Отношение процентного содержания насыщенных жирных кислот к ненасыщенным в этой группе находилось в пределах 0,33-0,45, при среднем значении 0,410,014.

При обследовании пациентов с синдромом инсулинорезистентности (62 человека), отношение процентного содержания насыщенных жирных кислот к ненасыщенным у всех больных превышало 0,45. При этом среднее значение этого показателя составило 0,730,012. Диагноз синдрома инсулинорезистентности в этой группе был верифицирован как клиническими данными, так и лабораторными тестами. Средний уровень C-пептида натощак в этой группе составил 7,260,11 нг/мл; иммунореактивного инсулина – 26,30,56 мкЕД/мл. Коэффициент корреляции между отношением процентного содержания насыщенных жирных кислот к ненасыщенным и уровнем C-пептида и иммунореактивного инсулина составил соответственно +0,913 и +0,821.

Полученные в ходе исследования результаты позволили сделать вывод о том, что отношение процентного содержания насыщенных жирных кислот к ненасыщенным может служить надежным критерием диагностики синдрома инсулинорезистентности. Значение этого показателя более 0,45 позволяет поставить диагноз синдрома инсулинорезистентности, не прибегая к другим клиническим и лабораторным методам.

Пример 1. Больной Д., 73 лет, направлен в стационар с диагнозом: ишемическая болезнь сердца, стенокардия напряжения III ф.кл., постинфарктный кардиосклеоз, H₁; атеросклероз аорты и сосудов головного мозга, артериальная гипертензия. В качестве антиангинального и антигипертензивного препарата получал бета-адреноблокатор анаприлин по 40 мг 4 раза в сутки. АД при поступлении 160/90 мм рт.ст. Гликемический профиль: 8⁰⁰ -3,5 ммоль/л; 11⁰⁰ – 5,6 ммоль/л; 14⁰⁰ – 4,6 ммоль/л. Пероральный тест на толерантность к глюкозе: исходно – 5,6 ммоль/л; через 60 минут после дачи 75 г глюкозы – 8,7 ммоль/л; через 180 минут – 6,0 ммоль/л. Мочевая кислота – 465 мкмоль/л (N – до 458 мкмоль/л). Иммунореактивный инсулин – 22 мкЕД/мл; C-пептид – 3,9 нг/мл. Анализ проведенных лабораторных исследований не позволял достоверным образом судить о наличии у пациента синдрома инсулинорезистентности. Больному выполнено исследование по описанной выше методике. Коэффициент соотношения насыщенных жирных кислот к ненасыщенным составил 0,54. Это позволило диагностировать у больного синдром инсулинорезистентности, и в связи с этим отменить назначенный ранее анаприлин, как препарат, усугубляющий это состояние. Больному назначен верапамил в дозе 80 мг 3 раза в день, что привело к улучшению состояния метаболических процессов при наличии адекватного антиангинального и антигипертензивного действия.

Пример 2. Больной К., 43 лет, обратился в поликлинику с жалобами на избыточный вес и периодическое повышение артериального давления до 155/90 мм рт. ст. , сопровождающееся головной болью. При объективном исследования установлено наличие у пациента избыточного веса (индекс массы тела 28 кг/м²). Суточное мониторирование АД, проведенное в условиях стационара, патологии не выявило. В ходе проведенного биохимического исследования нарушений углеводного обмена по результатам теста на толерантность к глюкозе выявлено не было. Уровень C-пептида составил 4,0 нг/мл (верхний предел нормы). Для уточнения диагноза и выбора тактики лечения проведено определение жирнокислотного состава лимфоцитов. Коэффициент соотношения насыщенных жирных кислот к ненасыщенным составил 5,1, что позволило выявить у пациента наличие синдрома инсулинорезистентности. Были даны рекомендации по диете. Предписано выполнение аэробных физических нагрузок. В течение полугода пациент следовал вышеукакзанным рекомендациям, что позволило снизить массу тела (индекс массы тела составил 19 кг/м²). Уровень C-пептида снизился до 2,8 нг/мл, а коэффициент соотношения насыщенных жирных кислот к ненасыщенным при повторном исследовании составил 0,41.

Пример 3. Больной С., 58 лет, поступил в стационарное отделение с диагнозом гипертоническая болезнь II стадии. Амбулаторно принимал эналаприл, однако эффект от проводимой терапии был незначительным. С целью исключения у пациента наличия синдрома инсулинорезистентности выполнено исследование жирнокислотного состава лимфоцитов по описанной выше методике. Коэффициент соотношения насыщенных жирных кислот к ненасыщенным был равен 0,39. Это позволило отвергнуть предположение о наличии у пациента синдрома инсулинорезистентности. Это позволило назначить пациенту антигипертензивный препарат тенорик-100 (-адреноблокатор атенолол + диуретик гипотиазид) по 1 таблетке 1 раз в день, без риска ухудшить метаболические процессы в организме. В ходе проведенного лечения состояние больного улучшилось, нормализовался уровень артериального давления.

Пример 4. Больной Т., 35 лет, поступил в стационарное терапевтическое отделение с диагнозом сахарный диабет II типа, алиментарно-конституциональное ожирение II степени. С целью уточнения генеза сахарного диабета и выбора тактики лечения проведено исследование жирнокислотного состава лимфоцитов. Коэффициент соотношения насыщенных жирных кислот к ненасыщенным составил 0,66. Уровень иммунореактивного инсулина составил 31,0 мкЕД/мл, а C-пептида – 6,9 нг/мл. Поскольку сахарный диабет у этого пациента развился в результате снижения чувствительности периферических тканей к инсулину (инсулинорезистентности), был назначен препарат метформин, уменьшающий инсулинорезистентность. Это позволило не только добиться нормализации показателей углеводного обмена у пациента, но и снизить массу тела. При повторном исследовании, проведенном у больного спустя 11 месяцев после назначения метформина, коэффициент соотношения насыщенных жирных кислот к ненасыщенным составил 0,52, что свидетельствовало об усилении чувствительности периферических тканей к инсулину. Полученный результат подтверждался и снижением концентрации иммунореактивного инсулина и C-пептида, соответственно до 24 мкЕД/мл, а C-пептида – 4,3 нг/мл.

По сравнению с прототипом способ обладает следующими преимуществами:
1. Способ позволяет более достоверно оценить наличие у пациентов синдрома инсулинорезистентности.

2. Способ является прямым методом определения инсулинорезистентности, поскольку основан на выявлении причины развития этого синдрома.

3. Способ может быть реализован на ранних этапах синдрома инсулинорезистентности.

4. Способ расширяет круг лиц, у которых возможно проведение диагностики синдрома инсулинорезистентности.

Формула изобретения

Способ диагностики синдрома инсулинорезистентности путем исследования крови пациента, отличающийся тем, что исследованию подвергают лимфоциты, выделенные из венозной крови, взятой натощак, далее в лимфоцитах методом газожидкостной хроматографии определяют жирно-кислотный состав, содержание насыщенных и ненасыщенных жирных кислот, затем рассчитывают их соотношение и при значении этого показателя более 0,45 диагностируют синдром инсулинорезистентности.

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 27.08.2001

Номер и год публикации бюллетеня: 12-2003

Извещение опубликовано: 27.04.2003