Патент на изобретение №2247384

(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СИНДРОМА РЕЙНО

(57) Реферат:

Изобретение относится к области иммуногенетики и может быть использовано для диагностики синдрома Рейно. Сущность изобретения состоит в том, что проводят типирование лимфоцитов периферической крови по HLA – антигенам первого и второго класса, а именно локусы HLA-А, В и локусы HLA-DR соответственно, при выявлении хотя бы одного из гаплотипов А3В7, A2DR11, A2DR2, A2DR5 диагностируют наличие высокого риска возникновения синдрома Рейно. Техническим результатом является повышение точности диагностики и возможность оценки риска развития заболевания. 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике заболеваний посредством исследования характеристик крови в организме, и может быть использовано для диагностики риска заболевания синдрома Рейно путем иммуногенетических исследований.

Известно, что клиническое значение лабораторного теста определяется, в частности, его специфичностью (Е.Г.Бутслин, В.Г.Иванов “Клиническая информативность основных лабораторных показателей биологических жидкостей организма”, Ижевск: Издательство Экспертиза, 1998, с.13). Недостаток известного способа состоит в снижении его клинического значения из-за отсутствия специфичности, поскольку из литературы известны случаи синдрома Рейно и при пониженной вязкости крови, что ставит под сомнение утверждение о существенном влиянии повышенной вязкости крови на периферическое сосудистое сопротивление (Орап О.И. Диагностика и лечение болезни и синдрома Рейно: дис. канд. мед. наук /Киев, 1988).

Наиболее близким к предлагаемому является способ диагностики синдрома Рейно, в соответствии с которым выполняют иммунологические тесты, в результате которых определяют уровень пропердина, лизоцима и комплемента сыворотки крови, и при их достоверном снижении диагностируют наличие заболевания (Орап О.И. Диагностика и лечение болезни и синдрома Рейно: дис. канд. мед. наук / Киев, 1988).

Недостаток этого способа также заключается в снижении его клинического значения результатов диагностики из-за отсутствия специфичности.

Кроме того, недостаток выявленных известных способов диагностики заключается в том, что они указывают на отклонения в организме больного, характерные для синдрома Рейно, но не позволяют оценить степень риска возникновения заболевания.

Таким образом, выявленные в результате патентного поиска аналог и прототип заявленного способа диагностики заболевания синдрома Рейно при осуществлении не обеспечивают достижение технического результата, заключающегося в повышении клинического значения результатов диагностики за счет специфичности способа, а также в возможности оценки степени риска возникновения заболевания.

Предлагаемый способ диагностики заболевания синдрома Рейно решает задачу создания соответствующего способа, осуществление которого обеспечивает достижение технического результата, заключающегося в повышении клинического значения результатов диагностики за счет специфичности способа, а также в возможности оценки степени риска возникновения заболевания.

Сущность изобретения заключается в том, что в способе диагностики синдрома Рейно, включающем исследование крови больного, диагностируют риск заболевания, для чего выполняют иммуногенетические тесты, в соответствии с которыми выполняют типирование лимфоцитов периферической крови по HLA – антигенам первого и второго класса, а именно локусы HLA-A, В и локусы HLA-DR соответственно, при этом если в результате типирования выявляют хотя бы один из гаплотипов А3В7, A2DR1, A2DR2, A2DR5, то диагностируют наличие высокого риска возникновения синдрома Рейно.

Заявленный способ диагностики синдрома Рейно основан на фактическом материале и открытиях в эксперименте, поскольку клинические исследования HLA – антигенов первого и второго класса в отношении синдрома Рейно являются новым направлением в диагностике данного заболевания и ранее никем не проводились.

Авторами для исследования выбраны HLA – антигены первого и второго класса как антигены главного комплекса по гистосовместимости, что повышает достоверность, а следовательно, клиническую ценность результатов тестов.

Кроме того, HLA – комплекс выбран благодаря тому, что в настоящее время достоверно известно наличие в HLA – комплексе локализации гена иммунного ответа человека (Ю.М.Зарецкая “Клиническая иммуногенетика”, M.: Медицина, 1983, с.133, с.143). Синдром Рейно рассматривают, в частности, как аутоиммунную патологию, что дало основание авторам предположить, что в фенотипе больного должен присутствовать ген иммунного ответа, отвечающий за предрасположенность к синдрому Рейно. Ген иммунного ответа проявляет активность при наличии антигенного стимула. В свою очередь, наличие активного иммунного процесса позволяет выявить маркеры активности гена иммунного ответа (Ю.М.Зарецкая “Клиническая иммуногенетика”, M.: Медицина, 1983, с.147). Опытным путем по результатам статистики, полученной при обследовании больных синдромом Рейно, в результате которого типируют лимфоциты периферической крови по HLA – антигенам первого и второго класса, а именно локусы HLA-A, В и локусы HLA-DR соответственно, авторами выявлены гаплотипы АЗВ7, A2DR1, A2DR2, A2DR5 – маркеры активности гена иммунного ответа, отвечающего за предрасположенность к синдрому Рейно. У человека система гена иммунного ответа многоаллельна (там же, с.144), что объясняет образование гаплотипов. В данном случае, у больных синдромом Рейно имеются гены-провокаторы, которые благодаря наличию эффекта неравновесного сцепления имеют высокую вероятность сцепления с геном, отвечающим за предрасположенность к синдрому Рейно. Можно предположить, что для болезни Рейно взаимосвязь сублокусов HLA-A, HLA-B, HLA-DR вызвана высоким значением неравновесного сцепления между их антигенами, что и позволило выявить конкретные гаплотипы – маркеры синдрома Рейно. Таким образом, наличие в крови пациента гаплотипов А3В7, A2DR1, A2DR2, A2DR5 является генетическим маркером, указывающим на развитие синдрома Рейно, а следовательно, на высокую степень риска возникновения синдрома Рейно.

Использование в качестве критерия для констатации степени риска заболевания гаплотипов, достоверно являющихся маркерами активности гена иммунного ответа, отвечающего за предрасположенность к синдрому Рейно, обуславливает специфичность способа, что повышает достоверность, а следовательно, повышает клиническую ценность результатов диагностики.

Таким образом, предлагаемый способ диагностики заболевания синдрома Рейно при осуществлении обеспечивает достижение технического результата, заключающегося в повышении клинического значения результатов диагностики за счет специфичности способа, а также позволяет оценить степень риска возникновения заболевания.

Способ диагностики синдрома Рейно осуществляют следующим образом. Исследуют кровь больного. Для этого выполняют иммуногенетические тесты, в соответствии с которыми выполняют типирование лимфоцитов периферической крови по HLA – антигенам первого и второго класса, а именно локусы HLA-A, В и локусы HLA-DR соответственно. При этом, если в результате типирования выявляют хотя бы один из гаплотипов А3В7, A2DR1, A2DR2, A2DR5, то диагностируют наличие высокого риска возникновения синдрома Рейно.

Производили взятие венозной крови. При типировании лимфоцитов использовали стандартный NIH-микролимфоцитотоксический тест и набор HLA-типирующих сывороток ЗАО Межрегионального центра иммуногенетики и гистотипирующих реагентов “Гисанс”.

Для доказательства критерия “промышленная применимость” приводим следующие результаты исследований. Исследовали группу пациентов с синдромом Рейно из 84 человек в возрасте от 18 до 22 лет, проживающих в г. Екатеринбурге. Все пациенты предъявляли идентичные жалобы на изменение окраски кожи кистей и стоп в виде цианоза и гиперемии; похолодание, онемение, гипергидроз, парастезии, незначительную пастозность в области пальцев кистей и стоп. Все пациенты имели второй класс ишемии конечностей, тетрапоражение было зарегистрировано у 82,1% пациентов.

Ниже приведена таблица наиболее часто встречаемых HLA-гаплотипов у пациентов с синдромом Рейно в сравнении с контрольной группой.

Из таблицы видны достоверные различия в частоте встречаемости антигенов системы HLA у пациентов с синдромом Рейно с контрольной группой: достоверно выделяются гаплотипы, которые отсутствуют в контрольной группе и имеются только в группе пациентов с синдромом Рейно, – А3В7, A2DR1, A2DR2, A2DR5. Последнее подтверждает достоверность их использования в качестве маркеров данного заболевания.

Способ может быть использован в совокупности с общепринятыми методами диагностики синдрома Рейно для рационального выбора терапии.

Пример. Больной К., 19 лет, обратился с жалобами на похолодание, онемение, гипергидроз, цианоз кожных покровов кистей и стоп. Больной был госпитализирован в отделение сосудистой хирургии для диагностики и выбора лечения. Диагностику проводили с помощью функциональных методов исследования: ультразвуковое исследование, капилляроскопия, реовазография, а также была взята биопсия мягких тканей верхней трети предплечья. Результаты исследований показали на отклонения в организме больного, характерные для синдрома Рейно. Для определения степени риска возникновения заболевания были выполнены иммуногенетические тесты в соответствии с заявленным способом. В результате тестирования были выявлены гаплотипы А3В7, A2DR2, A2DR5, что указывало на наличие у данного больного высокого риска возникновения синдрома Рейно. В результате больному была назначена специфическая терапия с учетом высокого риска заболевания.

Формула изобретения

Способ диагностики синдрома Рейно, включающий исследование крови больного, отличающийся тем, что диагностируют риск заболевания, для чего выполняют иммуногенетические тесты, в соответствии с которыми выполняют типирование лимфоцитов периферической крови по HLA-антигенам первого и второго классов, а именно: локусы HLA-A, В и локусы HLA-DR соответственно, при этом, если в результате типирования выявляют хотя бы один из гаплотипов АЗВ7, A2DR11, A2DR2, A2DR5, то диагностируют наличие высокого риска возникновения синдрома Рейно.

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 15.10.2005

Извещение опубликовано: 27.12.2006 БИ: 36/2006