Патент на изобретение №2245617

Published by on

РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ

ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА
ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ,
ПАТЕНТАМ И ТОВАРНЫМ ЗНАКАМ

(19)

(11)

2245617

(13)

(51) МПК ⁷

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ

Статус: по данным на 27.01.2011 – действует

(21), (22) Заявка: 99107382/13, 07.10.1997

(24) Дата начала отсчета срока действия патента:

07.10.1997

(30) Конвенционный приоритет:

08.10.1996 (пп.1, 5, 6, 10, 11) US 60/028,264
06.10.1997 (пп.2-4, 7-9) US 08/944,950

(45) Опубликовано: 10.02.2005

(15) Информация о коррекции:

Версия коррекции № 1 (

Кювета Mini-Protean II Dual Slab; 3,5 мл 10% акриламидного разделяющего буферного раствора для каждого геля. Сверху налить 4% концентрирующий буферный раствор. На гель подать рабочее напряжение 200 В постоянного тока.

10 х рабочий буферный раствор (250 ммоль/л трис(гидроксиметил)аминометан, 1,92 моль/л глицин, 1% додецилсульфат натрия, рН 8,3).

ИММОБИЛИЗОВАННАЯ СИНТЕТАЗА КРАХМАЛА

1. Приготовление экстракта

a) Концентрация ткани 100 мг/2 мл экстракционного буферного раствора.

b) Обработайте на гомогенизирующем устройстве Polytron при полной скорости в течение 20 секунд при температуре 4°С.

c) Центрифугируйте на роторной центрифуге SM24 при 17500 оборотов/мин и 4°С.

d) Сохраните экстракт для анализа растворимого фермента, ресуспендируйте таблетку в 2 мл экстракционного буферного раствора и обработайте, как это указано выше.

e) Повторите промывку еще два раза и ресуспендируйте в конечном объеме, равном 1 мл.

4. Методика

A) Прибавите в пробирку Эппендорфа 100 мкл буферного раствора (предварительно инкубированного при температуре проведения анализа)

25 мкл гликогена,

50 мкл экстракта.

B) Инкубируйте пробирки в течение 2 минут при требуемой температуре.

C) Начните реакцию путем прибавления 25 мкл аденозин-5’-дифосфат-глюкозы [меченой ¹⁴С].

D) Через 20 минут остановите реакцию путем прибавления

100 мкл 0,25 н. раствора NaOH,

1,0 мл метанола

Е) – Выдержите на льду в течение 5 минут,

– процентрифугируйте в микроцентрифуге на полной скорости в течение 5 минут при 4°С,

– отсосите отбрасываемую надосадочную жидкость,

– 2 раза промойте таблетку, растворяя ее в 300 мкл 0,1 н. раствора NaOH,

– повторно осадите с помощью 1,0 мл метанола.

F) Растворите таблетку в 1 мл 1 М растворе НСl и прокипятите в течение 10 минут.

G) Охладите раствор и поместите 0,9 мл реакционной смеси во флакон и прибавьте 10 мл смеси “Ready Safe”.

5. Расчет

0,9 мл (радиоактивная порция) × 2 (коэффициент разбавления) х 1000 мкл (полный объем экстракта) × 1000 мг.

1,0 мл (полный объем) × 50 мкл (объем анализируемого экстракта) × 50 мг (масса ткани) × 20 (минут).

ДРУГИЕ РЕАЛИЗАЦИИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Частично восковидная пшеница – Описание

Известно несколько видов пшеницы с единичными нулевыми аллелями, и их можно обнаружить путем скрининга крахмалов на восковидные белки, полученные из геномов А, В или D гексаплоидной пшеницы. Такие генотипы с единичными нулевыми аллелями можно превратить в частично восковые типы посредством мутагенеза, осуществляемого с помощью таких же методов, что и описанные в настоящем патенте для генотипов с двойными нулевыми аллелями. Методика проведения мутаций единичного нулевого аллеля с получением двойного нулевого аллеля является такой же за тем исключением, что скрининг конечного продукта проводится по-другому. Эту изогенную линию с одной дополнительной крахмальной мутацией обычно нельзя идентифицировать посредством модифицированного SDS-PAGE. Новая изогенная линия с точечной мутацией образует крахмал, который обладает такими же зонами белков, что и крахмал растений, не обработанных с помощью ЭМС. Для идентификации единичного нулевого аллеля с точечной мутацией в восковидном аллеле другой хромосомы необходим другой тест. Для восковидной крахмальной мутации идентифицирующий тест базируется на уменьшении процентного содержания амилозы в крахмале растений, обработанных с помощью ЭМС и обладающих нужной мутацией. Разумеется, поскольку процесс на основе ЭМС используется для получения частичного мутанта, то частичный мутант можно использовать для получения полного восковидного мутанта. Частичный восковидный мутант подвергается мутагенезу и затем скринингу на просмотровом столе с подсветкой и йодному тесту, как это описано выше.

В соответствии с вышеизложенным можно видеть, что этот многократный способ приведет к получению различных видов пшеницы и низкого содержания амилозы. Такие крахмалы восковидной пшеницы полезны для использования в различных продуктах питания и кормах. Крахмал восковидной пшеницы может заменить восковую кукурузу в различных продуктах питания и кормах, например, для увеличения срока годности различных хлебобулочных изделий и при желировании пирожных.

Хотя приведенное выше описание содержит примеры, они не должны рассматриваться как ограничивающие цели настоящего изобретения. Они представляют собой иллюстрации некоторых предпочтительных в настоящее время способов реализации настоящего изобретения.

Формула изобретения

1. Способ получения полиплоидного растительного материала с полным мутантным аллелем, производящим восковидный крахмал, включающий отбор растительного материала, содержащего неполный восковидный мутантный аллель, обработку указанного растительного материала мутагеном, вызывающим точечную мутацию хотя бы одного восковидного аллеля, приводящую к выработке инактивированного иммобилизованного белка, и скрининг потомства обработанного растительного материала для идентификации растительного материала с полным мутантным аллелем, производящим восковидный крахмал, содержащий инактивированный иммобилизованный белок.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что неполный восковидный мутантный аллель является двойным нулевым восковидным аллелем.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве мутагена используют этилметансульфонат (ЭМС).

4. Способ по п.1, отличающийся тем, что при проведении скрининга используют тестирование на непрозрачность семян.

5. Способ по п.1, отличающийся тем, что при проведении скрининга используют тестирование с помощью йода.

6. Способ получения полиплоидного растительного материала с полным мутантным аллелем, производящим восковидный крахмал, включающий отбор растительного материала, содержащего единичный восковидный мутантный аллель, обработку указанного растительного материала мутагеном, вызывающим точечную мутацию хотя бы одного восковидного аллеля, скрининг потомства обработанного растительного материала для идентификации растительного материала с неполным восковидным мутантным аллелем, обработку указанного растительного материала мутагеном, вызывающим точечную мутацию хотя бы одного восковидного аллеля, приводящую к выработке инактивированного иммобилизованного белка, и скрининг потомства обработанного растительного материала для идентификации растительного материала с полным мутантным аллелем, производящим восковидный крахмал, содержащий инактивированный иммобилизованный белок.

7. Способ по п.6, отличающийся тем, что неполный восковидный мутантный аллель является двойным нулевым восковидным аллелем.

8. Способ по п.6, отличающийся тем, что в качестве мутагена используют этилметансульфонат (ЭМС).

9. Способ по п.6, отличающийся тем, что при проведении скрининга используют тестирование на непрозрачность семян.

10. Способ по п.6, отличающийся тем, что при проведении скрининга используют тестирование с помощью йода.

11. Способ осуществления скрининга потомства обработанного растительного материала для идентификации растительного материала с полным мутантным аллелем, производящим восковидный крахмал, содержащий инактивированный иммобилизованный белок, включающий отбор растительного материала, содержащего восковидный крахмал, отделение восковидного крахмала, выделение инактивированного иммобилизованного белка из восковидного крахмала, определение положения инактивированного иммобилизованного белка в крахмале и идентификацию происхождения мутантного растительного материала и наличия необходимых крахмальных мутаций.

TZ4A – Поправки к описаниям изобретений

Часть описания, где обнаружена ошибка: Текст опис., страница 5, строка 46

Напечатано: – Можно добавить идентифицирующие термины…

Следует читать: * Можно добавить идентифицирующие термины…