Патент на изобретение №2241034

(54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ХОЛЕРНОГО ВИБРИОНА

(57) Реферат:

Изобретение относится к микробиологии, в частности касается способа получения питательных сред, обеспечивающих оптимальные условия для жизнедеятельности холерного вибриона, может быть использовано в микробиологии и биотехнологии. Питательная среда для культивирования холерного вибриона содержит натрия хлорид, в качестве питательной основы – рафинадную патоку, водопроводную воду и сульфит натрия в качестве стимулятора роста холерного вибриона. Изобретение позволяет упростить способ приготовления питательной среды, а также снизить ее стоимость.

Изобретение относится к микробиологии, в частности к получению питательных сред, которые создают оптимальные условия для выделения и культивирования холерного вибриона.

При бактериологическом исследовании на холеру используют различные питательные среды: жидкие среды обогащения, щелочной агар, элективные дифференциально-диагностические среды и набор сред для идентификации (Лабинская А.С. Практикум по микробиологическим методам исследования. – М.: Медгиз, 1963, с.443). Основой известных питательных сред являются продукты животного происхождения – пептон, экстракт молодого мяса и др.

Однако перечисленные выше среды дороги.

Наиболее близкой к предлагаемой питательной среде является жидкая среда обогащения, содержащая 100 г пептона, 50 г натрия хлорида, 1 г нитрата калия, 20 г натрия бикарбоната, 1 л дистиллированной воды (Биргер М.О. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. – M., 1982, с.65).

Недостатком данной среды является ее дороговизна и сложность в приготовлении.

Цель настоящего изобретения заключается в подборе основы питательных сред растительного происхождения, которая бы обеспечивала накопительный эффект и снижение ее стоимости, а также упрощение способа приготовления.

Поставленная цель достигается тем, что питательной основой предлагаемой питательной среды является патока рафинадная, натрия хлорид на водопроводной воде с добавлением в жидкую питательную среду стимулирующей добавки, причем в качестве стимулирующей добавки используют сульфит натрия при следующем соотношении ингредиентов, г/л:

Патока рафинадная 20,0

Натрия хлорид 5,0

Натрия сульфита 0,4

Водопроводная вода Остальное

Патока рафинадная (ОСТ 18-233-75) в своем составе содержит не менее 45% сахарозы. В отличие от прототипа предлагаемая среда обеспечивает накопительные свойства, оптимальные условия и дешевизну.

Использование патоки рафинадной с натрием сульфита на водопроводной воде в качестве питательной основы является отличительным признаком предлагаемой питательной среды. Способ поясняется следующим примером.

Питательную среду готовят следующим образом: патоку рафинадную растворяют в водопроводной воде, добавляют натрий хлористый, нагревают до кипения, доводят рН до 7,7-8,0 20% гидроокисью натрия. Выпавший осадок отфильтровывают через тканевой фильтр с фильтровальной бумагой, к раствору добавляют необходимое количество натрия сульфита. Готовую среду разливают в градуированные флаконы по 100 мл и стерилизуют в автоклаве при 0:5 атм 30 мин. Согласно методических указаний по определению качества питательных сред для выращивания холерного вибриона (Инструкция по бактериологическому контролю диагностических питательных сред для холерного вибриона), готовят культуру авирулентного штамма НАГ-вибриона Р-9741. Для чего культуру, хранящуюся на полужидком агаре, высевают в 17% пептонную воду или бульон Мартена (рН 7,6-7,8) и инкубируют при 37°С в течение 3-5 ч, после чего высевают на чашку с агаром Мартена или Хоттингера (рН 7,6-7,8). Через 18-20 ч роста с агара отбирают гладкие колонии НАГ-вибриона Р-9741 пересевают их на агаровые пластинки (2-пассаж). Культуру выращивают 3-6 ч при 37°С, после чего используют для контроля. Из суточной культуры готовили взвесь м.т., равной 5 ед. по оптическому стандарту мутности по ОСО ГИСК им. Л.А.Тарасовича. Затем серийными десятикратными разведениями в физиологическом растворе в объеме 4,5 мл доводили до содержания в 1 мл 100 и 10 м. к. Из данных разведении взвеси культур высевали по 0,1 мл стерильной бактериологической пипеткой по 3 флакона опытной и контрольной среды. В качестве последней используется заранее проверенная высококачественная 1% пептонная вода, приготовленная на дистиллированной воде. Посевы инкубируют при 37°С 6 ч, после чего из каждого флакона с поверхности высевают петлей № 5 по Чаплевскому на чашку Петри с заранее проверенной высококачественной плотной средой. Выращивание производят при 37°С. Питательная среда жидкая считается пригодной в том случае, если при посеве 100 м.к. тест-штамма в 100 мл через 6 ч выращивания и последующего высева на агаровые пластинки вырастают соответственно не менее 10 и 1 колоний. Оценку ростовых свойств питательной среды проводят путем подсчета количества выросших колоний холерного вибриона при посеве содержимого флаконов на пластинки с плотной питательной средой.

Пример 1. Тест-штамм выращивали на питательной среде содержащей, г/л: патоку рафинадную 18,0; натрия хлорида 3,0; натрия сульфита 0,3; водопроводная вода – остальное. При таком соотношении ингредиентов количество колоний, выросших на плотных пластинках агара, для холерного вибриона высеянных из флаконов при посевной дозе 100 и 10 м. к., составило соответственно 15 и 2.

Пример 2. Тест-штамм выращивали на питательной среде содержащей, г/л: патоку рафинадную 20,0; натрия хлорида 5,0; натрия сульфита 0,4; водопроводная вода – остальное. При таком соотношении ингредиентов количество колоний, выросших на плотных пластинках агара, для холерного вибриона высеянных из флаконов при посевной дозе 100 и 10 м.к. составило соответственно 30 и 5.

Пример 3. Тест-штамм выращивали на питательной среде содержащей, г/л: патоку рафинадную 22,0; натрия хлорида 6,0; натрия сульфита 0,5; водопроводная вода – остальное. При таком соотношении ингредиентов количество колоний, выросших на плотных пластинках агара, для холерного вибриона высеянных из флаконов при посевной дозе 100 и 10 м. к. составило соответственно 13 и 2.

На 1% пептонной воде (контроль) количество выросших колоний составило 10 и 1 соответственно.

Полученные результаты позволили определить оптимальный вариант питательной среды на основе патоки рафинадной (пример 2).

Таким образом, на основании вышеизложенного можно сказать о явных преимуществах предлагаемой питательной среды, состоящей из патоки рафинадной 20,0 г/л; натрия хлористого 5,0 г/л; натрия сульфита 0,4 г/л; водопроводной воды – остальное.

Питательная среда технически проста в приготовлении без предварительного этапа подготовки основы.

Предлагаемая питательная среда дешевле, так как в основу берется растительное сырье (патока рафинадная с натрием сульфита) и для ее приготовления не требуется дистиллированной воды – среда готовится на водопроводной воде.

Формула изобретения

Питательная среда для культивирования холерного вибриона, содержащая питательную основу, натрия хлорид и воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит сульфит натрия в качестве стимулятора роста, в качестве питательной основы – рафинадную патоку, воды – водопроводную воду при следующем содержании ингредиентов, г/л:

Патока рафинадная 20,0

Натрия хлорид 5,0

Натрия сульфит 0,4

Водопроводная вода Остальное

MM4A – Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 10.07.2005

Извещение опубликовано: 27.04.2007 БИ: 12/2007